24小时热门版块排行榜    

查看: 1464  |  回复: 30

布丁3835

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】色谱柱问题 已有1人参与

本人现做一个化药分析,才用了2个星期的安捷伦色谱柱,型号ZORBAX Eclipse XDB4.6*150,粒径5um的柱子,现在主峰出现后延肩峰,而且峰变宽了,分离效果明显下降。每次用完之后都会用10%的甲醇以1.0的流速先冲一个小时,接着过度到100%的甲醇,由于样品是溶于甲醇的,完了之后用纯甲醇保存柱子。请教各位大侠怎么样恢复柱效,改善峰形,毕竟这是一根新柱子,不能就这么夭折了吧,谢谢。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音


布丁3835(金币+3):谢谢参与
冲柱方法没有问题,不应该是冲柱子的问题,还有两个楼主没说清楚,1。样品干不干净,2。实验时柱压是多少,现在柱压多少,从买来到现在柱压变化
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
2楼2010-10-28 13:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布丁3835

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-10-28 13:19:40:
冲柱方法没有问题,不应该是冲柱子的问题,还有两个楼主没说清楚,1。样品干不干净,2。实验时柱压是多少,现在柱压多少,从买来到现在柱压变化

实验时柱压约150bar,从使用到变化之前柱压都没什么变化;样品是实验室合成的,说不清干不干净;流动相里头有缓冲盐,走梯度。
3楼2010-10-28 13:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lfycdymax

铁杆木虫 (著名写手)


布丁3835(金币+3):谢谢参与
也的样品本身对柱子就是一个伤害……
突然好想你……
4楼2010-10-28 14:01:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音


布丁3835(金币+3):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 布丁3835 at 2010-10-28 13:59:41:

实验时柱压约150bar,从使用到变化之前柱压都没什么变化;样品是实验室合成的,说不清干不干净;流动相里头有缓冲盐,走梯度。

150pa算比较高了,能把具体流动相说一下吗,特别是缓冲盐和最后一个梯度
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
5楼2010-10-28 14:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布丁3835

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lfycdymax at 2010-10-28 14:01:09:
也的样品本身对柱子就是一个伤害……

就算有伤害也不会那么快吧,才用了2个星期呢
6楼2010-10-28 14:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布丁3835

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-10-28 14:03:17:

150pa算比较高了,能把具体流动相说一下吗,特别是缓冲盐和最后一个梯度

流动相A:约0.65g磷酸铵和2g四丁基氢氧化氨溶于500ml水,用磷酸调ph为7.5左右。
流动相B是纯甲醇。
最后一个梯度是25分钟90%的B过渡到26分钟时60%的B,梯度应该没什么问题,根据药典上做的调整
7楼2010-10-28 14:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音

引用回帖:
Originally posted by 布丁3835 at 2010-10-28 14:08:05:

流动相A:约0.65g磷酸铵和2g四丁基氢氧化氨溶于500ml水,用磷酸调ph为7.5左右。
流动相B是纯甲醇。
最后一个梯度是25分钟90%的B过渡到26分钟时60%的B,梯度应该没什么问题,根据药典上做的调整

明白了,问题可能在这里,磷酸是柱子头号杀手,磷酸堵柱子那是相当厉害,90%的甲醇你能保证磷酸盐在这么高的浓度下不析出吗,如果析出了就是极其细小的结晶颗粒,密密麻麻的分布,这些细小颗粒很难再次溶解,药典方法不能随便改只能平时注意了,给几个建议1。做实验跑上流动相后不要轻易停泵或降低流速,防止磷酸析出2。每天第一次做实验时用10%甲醇水冲一下柱子,防止新流动相进入柱子时柱子里还是甲醇,这样会析出3。冲柱子甲醇水的时间延长,一个半小时左右。纯个人经验仅供参考,有不足或错误之处见谅
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
8楼2010-10-28 14:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布丁3835

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-10-28 14:13:54:

明白了,问题可能在这里,磷酸是柱子头号杀手,磷酸堵柱子那是相当厉害,90%的甲醇你能保证磷酸盐在这么高的浓度下不析出吗,如果析出了就是极其细小的结晶颗粒,密密麻麻的分布,这些细小颗粒很难再次溶解,药 ...

谢谢你的建议,现在问题发生了,我该怎么样恢复柱效呢
9楼2010-10-28 14:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwerasdf2783

金虫 (著名写手)


布丁3835(金币+3):谢谢参与
1。中药对柱子损伤很大,100多针就可以了,你算算进了多少针。
2。如果是磷酸盐析出,用完后用10%MeOH+90%纯水冲(非缓冲液),再用MeOH冲。
10楼2010-10-28 14:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 布丁3835 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见