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proteinwang

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重叠PCR相关问题。 已有8人参与

大家好,近短时间在做重叠PCR,本来打算进行三片段的重叠融合,引物设计时重叠区域30bpbp,但是一直没有做出来。
更换方案两片段融合后再将融合好的片段与第三个片段融合,电泳结果显示两片段融合后大小是正确的,但是以两片段融合好的基因片段为模板,融合时的引物进行PCR,扩不出东西来。
请有相关经验的高手指点!
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taigongzaici

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感兴趣,随时关注,哪位高人指点一下,头一次听说
3楼2010-10-16 08:45:10
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proteinwang

铜虫 (正式写手)

自己顶一下,不要沉了!
2楼2010-10-16 08:41:30
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hackett

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是在做这个,是不是一开始拼模板的循环数要多一点。毕竟3个基因拼到一起的概率好像不大啊。我还在摸条件。拼模板的温度地点比较好。
Dreamer
4楼2012-04-14 23:12:18
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chlamy

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流,很热心哦 2012-05-25 13:42:02
引用回帖:
1154687楼: Originally posted by proteinwang at 2010-10-15 15:20:34:
大家好,近短时间在做重叠PCR,本来打算进行三片段的重叠融合,引物设计时重叠区域30bpbp,但是一直没有做出来。
更换方案两片段融合后再将融合好的片段与第三个片段融合,电泳结果显示两片段融合后大小是正确的 ...

看看这个文件对你有没有帮助,我用这种办法把四个片段拼出来了
5楼2012-04-19 16:43:13
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