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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠PCR相关问题。
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proteinwang

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重叠PCR相关问题。 已有8人参与

大家好，近短时间在做重叠PCR，本来打算进行三片段的重叠融合，引物设计时重叠区域30bpbp，但是一直没有做出来。
更换方案两片段融合后再将融合好的片段与第三个片段融合，电泳结果显示两片段融合后大小是正确的，但是以两片段融合好的基因片段为模板，融合时的引物进行PCR，扩不出东西来。
请有相关经验的高手指点！
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1楼 2010-10-15 15:20:34
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proteinwang

铜虫 (正式写手)
自己顶一下，不要沉了！
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2楼2010-10-16 08:41:30
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感兴趣，随时关注，哪位高人指点一下，头一次听说
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3楼2010-10-16 08:45:10
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hackett

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是在做这个，是不是一开始拼模板的循环数要多一点。毕竟3个基因拼到一起的概率好像不大啊。我还在摸条件。拼模板的温度地点比较好。
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Dreamer
4楼2012-04-14 23:12:18
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chlamy

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，很热心哦 2012-05-25 13:42:02
引用回帖:
1154687楼: Originally posted by proteinwang at 2010-10-15 15:20:34:
大家好，近短时间在做重叠PCR，本来打算进行三片段的重叠融合，引物设计时重叠区域30bpbp，但是一直没有做出来。
更换方案两片段融合后再将融合好的片段与第三个片段融合，电泳结果显示两片段融合后大小是正确的 ...

看看这个文件对你有没有帮助，我用这种办法把四个片段拼出来了
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5楼2012-04-19 16:43:13
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海尤希

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加油啊，再等几天我也要做三个基因的重叠PCR了~~~
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冷静、加油。
6楼2012-05-14 19:26:14
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mxlo.o

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2394678楼: Originally posted by chlamy at 2012-04-19 16:43:13
看看这个文件对你有没有帮助，我用这种办法把四个片段拼出来了

我最近看了一部分的资料。但是对于连个片段之间的重叠区域仍是不太了解，我从一篇文章上使用的引物重叠区域有22bp的重合。而有的说是40bp。不知道哪一个种效果比较好
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7楼2012-05-25 10:15:20
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li李2014

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我想问下，，你的片段大概是多大呢，还有那个文献说阶段2退火用72℃，延伸也是72么，，反应体系和程序能否告诉下，，我三个片段，700bp，1887bp，700bp前两个连好了，，三个一起连总不成功，，试了很多次，
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8楼2013-10-08 11:21:52
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gqw616

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by chlamy at 2012-04-19 16:43:13
看看这个文件对你有没有帮助，我用这种办法把四个片段拼出来了...

我最近也在做，特异性不好，总是有两条带！
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9楼2014-07-29 21:44:23
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