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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Realtime PCR actin 内参 两条带
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Realtime PCR actin 内参 两条带

用Realtime PCR actin 内参 扩增得到两条内参的目的条带，我的目的条带很特异只有一条，请问这是怎么回事？
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见得多爱的多
1楼 2010-10-02 14:07:57
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fly2000 at 2010-10-02 22:59:35:
如果你的模板是cDNA的话，出现这样的结果说明你的引物设计有问题。很可能同时扩增出gDNA和cDNA上对应区域，建议引物设计时选择跨内含子区域，避免扩增gDNA。 　

跨内含子的话，岂不是到时候，若有DNA污染的话，还是有两条带？？？主要是我提取RNA的时候已经按照说明书操作了，咋还有DNA污染呢？

还有一个问题：

我有PCR Mix PCR的时候没有非特异条带，但是用SYBR GREEN Mix PCR的时候咋就出现非特异条带了呢？
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见得多爱的多
3楼2010-10-05 23:34:36
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fly2000

新虫 (初入文坛)
★
看天(金币+1):鼓励新人回答 2010-10-03 03:18:06
pidou213(金币+2): 2010-10-05 23:32:18
如果你的模板是cDNA的话，出现这样的结果说明你的引物设计有问题。很可能同时扩增出gDNA和cDNA上对应区域，建议引物设计时选择跨内含子区域，避免扩增gDNA。 　
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2楼2010-10-02 22:59:35
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怎么都行

银虫 (小有名气)
pidou213(金币+1):这可能是一个原因，还有其他的原因吗？ 2010-10-06 16:58:49
你的SYBR GREEN Mix是用过的么？说不定有污染啊
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4楼2010-10-06 02:03:30
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