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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Realtime PCR actin 内参 两条带

用Realtime PCR actin 内参 扩增得到两条内参的目的条带,我的目的条带很特异只有一条,请问这是怎么回事?
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fly2000

新虫 (初入文坛)


看天(金币+1):鼓励新人回答 2010-10-03 03:18:06
pidou213(金币+2): 2010-10-05 23:32:18
如果你的模板是cDNA的话,出现这样的结果说明你的引物设计有问题。很可能同时扩增出gDNA和cDNA上对应区域,建议引物设计时选择跨内含子区域,避免扩增gDNA。  
2楼2010-10-02 22:59:35
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by fly2000 at 2010-10-02 22:59:35:
如果你的模板是cDNA的话,出现这样的结果说明你的引物设计有问题。很可能同时扩增出gDNA和cDNA上对应区域,建议引物设计时选择跨内含子区域,避免扩增gDNA。  

跨内含子的话,岂不是到时候,若有DNA污染的话,还是有两条带???主要是我提取RNA的时候已经按照说明书操作了,咋还有DNA污染呢?

还有一个问题:

我有PCR Mix PCR的时候没有非特异条带,但是用SYBR GREEN Mix PCR的时候咋就出现非特异条带了呢?
见得多爱的多
3楼2010-10-05 23:34:36
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怎么都行

银虫 (小有名气)

pidou213(金币+1):这可能是一个原因,还有其他的原因吗? 2010-10-06 16:58:49
你的SYBR GREEN Mix是用过的么?说不定有污染啊
4楼2010-10-06 02:03:30
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