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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒 已有9人参与

虫友们转化大肠杆菌和农杆菌后，扩增目的片段好扩吗？会不会转进去了又扩不出来呀？
我转化的大肠杆菌和农杆菌在加相应抗生素的培养基里长得很正常，应该是转进去了才会长出来单菌落，可是怎么都扩不出来目的片段，到底是怎么回事呢，头疼死了！
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1楼 2010-09-28 20:02:56
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-29 07:24:04
大肠杆菌一般不会出这种情况吧。假阳性可能是污染吧，楼主可由做对照：
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仕不可不弘毅，任重而道远
2楼2010-09-28 20:20:43
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axskywings

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的也是转化大肠杆菌以后还没有扩出来
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3楼2010-09-28 21:45:12
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-29 07:24:13
一则有可能是杂菌污染，因为实验室经常做类似实验，所以会有许多带有相关抗性的菌体扩散出来。
二则，确定目的片段已经连接到载体上了么？
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4楼2010-09-28 23:46:44
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zhixuec

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对，要确定目的片段是否已经连接到载体上？
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酷爱の族
5楼2010-09-28 23:59:53
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cjk9

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
路过
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6楼2010-09-29 00:05:36
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)
目的片段确定转到载体上了
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7楼2010-09-29 08:45:34
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xufang7763

木虫 (正式写手)
★
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用质粒转化到农杆菌里，老是菌落可以扩出来，摇起来的菌液扩不出，是个怎么回事啊？
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人生就像赌博，有输有赢！
8楼2012-12-17 11:04:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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引用回帖:
2415696楼: Originally posted by xufang7763 at 2012-12-17 11:04:40
用质粒转化到农杆菌里，老是菌落可以扩出来，摇起来的菌液扩不出，是个怎么回事啊？

取一点点的农杆菌液，离心，然后加上水，先100煮10分钟，然后再作为模板扩增，这样会好些，我以前做过农杆菌菌液PCR验证，都做出来过
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2012-12-17 11:15:58
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xufang7763

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
2415699楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-17 11:15:58
取一点点的农杆菌液，离心，然后加上水，先100煮10分钟，然后再作为模板扩增，这样会好些，我以前做过农杆菌菌液PCR验证，都做出来过...

这样做和直接用菌液作为模板有什么区别吗？第一次听说用这样的方法，请问取多少菌液离心，还有事100度吗，是要变性吗？
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人生就像赌博，有输有赢！
10楼2012-12-17 18:40:37
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