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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒 已有9人参与

虫友们转化大肠杆菌和农杆菌后，扩增目的片段好扩吗？会不会转进去了又扩不出来呀？
我转化的大肠杆菌和农杆菌在加相应抗生素的培养基里长得很正常，应该是转进去了才会长出来单菌落，可是怎么都扩不出来目的片段，到底是怎么回事呢，头疼死了！
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1楼 2010-09-28 20:02:56
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gyesang

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2415696楼: Originally posted by xufang7763 at 2012-12-17 11:04:40
用质粒转化到农杆菌里，老是菌落可以扩出来，摇起来的菌液扩不出，是个怎么回事啊？

取一点点的农杆菌液，离心，然后加上水，先100煮10分钟，然后再作为模板扩增，这样会好些，我以前做过农杆菌菌液PCR验证，都做出来过
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9楼2012-12-17 11:15:58
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gyesang

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2415728楼: Originally posted by xufang7763 at 2012-12-17 18:40:37
这样做和直接用菌液作为模板有什么区别吗？第一次听说用这样的方法，请问取多少菌液离心，还有事100度吗，是要变性吗？...

直接取菌液，农杆菌的培养基高盐对PCR反应有干扰，此外，农杆菌细胞壁比较厚，所以要先煮10分钟，取10ul离心够了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
11楼2012-12-17 19:55:16
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