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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌,农杆菌质粒 已有9人参与

虫友们转化大肠杆菌和农杆菌后,扩增目的片段好扩吗?会不会转进去了又扩不出来呀?
我转化的大肠杆菌和农杆菌在加相应抗生素的培养基里长得很正常,应该是转进去了才会长出来单菌落,可是怎么都扩不出来目的片段,到底是怎么回事呢,头疼死了!
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2415728楼: Originally posted by xufang7763 at 2012-12-17 18:40:37
这样做和直接用菌液作为模板有什么区别吗?第一次听说用这样的方法,请问取多少菌液离心,还有事100度吗,是要变性吗?...

直接取菌液,农杆菌的培养基高盐对PCR反应有干扰,此外,农杆菌细胞壁比较厚,所以要先煮10分钟,取10ul离心够了
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
11楼2012-12-17 19:55:16
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-29 07:24:04
大肠杆菌一般不会出这种情况吧。假阳性可能是污染吧,楼主可由做对照:
仕不可不弘毅,任重而道远
2楼2010-09-28 20:20:43
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axskywings

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的也是转化大肠杆菌以后还没有扩出来
3楼2010-09-28 21:45:12
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怎么都行

银虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-29 07:24:13
一则有可能是杂菌污染,因为实验室经常做类似实验,所以会有许多带有相关抗性的菌体扩散出来。
二则,确定目的片段已经连接到载体上了么?
4楼2010-09-28 23:46:44
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