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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大
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cgt713

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大已有7人参与

当时设计的分子量是16K，表达出来蛋白跑SDS-PAGE 是20K，请帮忙解释下 谢谢
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1楼2010-09-16 14:59:10
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cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by xiaoyu9940 at 2010-09-16 15:08:33:
有没有纯化标记什么的，你算在里面了吗 例如GST

没有啊 没有加纯化标签的
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5楼2010-09-16 17:35:11
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cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by sfxt001 at 2010-09-16 15:12:54:
要算上Tag的大小，还有有时候算出来的分子量不一定准。

不准也不能这么不准吧 呵呵
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6楼2010-09-16 17:35:34
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cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

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Originally posted by 月月大可 at 2010-09-16 16:40:48:
二楼的，GST标签26KD

说句实话这种通过SDS-PAGE获取的表观分子量略大于理论分子量是很正常的现象。

你也要考虑起始密码子开始区有没有非你目的蛋白的氨基酸引入，下游是否引入终止密码子，没有引入下游也会 ...

会有这么大的差异吗？
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7楼2010-09-16 17:36:15
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cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-09-16 17:57:52:
另外蛋白本身的高级结构也会影响迁移速率！

如果可以有这么大的差异的话 那该怎么设计呢  我们现在做的蛋白都偏大啊
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10楼2010-09-17 08:15:52
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cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-09-17 13:36:50:


表观分子量和实际分子量有差异这是非常正常的现象，你只要确定是你的目的蛋白，而测序结果又没有问题直接往下进行试验。

想得到确定的答案可以考虑对蛋白的N端进行测序。

那外面的公司在买的表达蛋白 好像都没有什么偏差啊
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15楼2010-09-19 08:50:22
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cgt713

银虫 (小有名气)
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Originally posted by gene001 at 2010-09-19 19:08:47:
我记得在SDS-PAGE电泳结果中出现分子量10%的差距是属于正常的！可你这个稍微大了点，也未必是蛋白质错误表达，可以纯化点样品测N端和C端氨基酸序列来验证表达的蛋白质的正确性！不过这样实验似乎费用和难度都很大 ...

嗯 谢谢
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17楼2010-09-24 08:22:34
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cgt713

银虫 (小有名气)
18楼2010-09-26 08:36:54
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