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lijunping68

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[交流] 【求助/交流】3'RACE问题

我做3'RACE做了两个多月了，可每次都出现弥散而且还有在700bp左右大小和1000bp左右大小有条带，不知道为什么会有弥散，回收酶切鉴定都正确，可是测序结果什么都不是，是什么原因呢？我想要的目的条带应该在1600bp左右，模板我鉴定过了，没什么问题，我设计的内外侧引物长度19bp和20bp，谢谢各位，帮帮我吧！

[ Last edited by lijunping68 on 2010-9-16 at 12:50 ]

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1楼 2010-09-16 11:06:49

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sai00fuji

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dhd997(金币+6): good 2011-04-06 08:13:46

我前天才开始做3‘race，可能没法给你什么建议，但是说说我的经历说不定能有点帮助。
最开始得到的是400bp的片段，去ncbi上blast，是我要的功能序列。所以准备做3’race。这里提一下，我blast的时候特别注意了一下我的片段是正义还是反义的，结果是反义链，所以我是按照互补序列设计的引物。
我提取的RNA质量不错，像广告图一样的。
然后p出的片段是900bp，应该说是合理的片段范围，现在还没测序，也不太清楚结果。
用的是takara的AMV反转录试剂盒