24小时热门版块排行榜    

查看: 1933  |  回复: 9

lijunping68

[交流] 【求助/交流】3'RACE问题

我做3'RACE做了两个多月了,可每次都出现弥散而且还有在700bp左右大小和1000bp左右大小有条带,不知道为什么会有弥散,回收酶切鉴定都正确,可是测序结果什么都不是,是什么原因呢?我想要的目的条带应该在1600bp左右,模板我鉴定过了,没什么问题,我设计的内外侧引物长度19bp和20bp,谢谢各位,帮帮我吧!

[ Last edited by lijunping68 on 2010-9-16 at 12:50 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

lijunping68(金币+1): 2010-09-16 12:49:05
lijunping68(金币+1): 2010-09-21 09:21:34
测序结果啥都不是是啥意思?不是你的目的基因吗?你的目的条带位置应该在1600左右,是加了3‘utr和PolyA之后的长度吗?如果不是的话,那么你的目的条带位置可能在2000左右呢。看看PCR的条件是不是时间短了,然后引物我觉得也有点短,如果引物的特异性不好的话,可以设计的长一些。
2楼2010-09-16 11:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongyuan1016

铁虫 (初入文坛)

试试巢式PCR
3楼2010-09-16 11:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijunping68

3'RACE问题

我3‘RACE PCR延伸时间是2min,测序结果在NCBI上Blast后没有和其相似的序列,和原来已扩出来的片段也拼接不上
4楼2010-09-16 12:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

lijunping68(金币+1): 2010-09-16 20:50:21
lijunping68(金币+1): 2010-09-21 09:21:23
建议楼主重提RNA做反转录!
jiayoubashaonian
5楼2010-09-16 13:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

lijunping68(金币+1): 2010-09-17 15:06:44
lijunping68(金币+1): 2010-09-21 09:21:13
引用回帖:
Originally posted by lijunping68 at 2010-09-16 12:55:15:
我3‘RACE PCR延伸时间是2min,测序结果在NCBI上Blast后没有和其相似的序列,和原来已扩出来的片段也拼接不上

这个时间应该没问题。跟原来的序列接不上,blastX也不是类似功能的基因吗?那就是错配了,你说跟原来的序列对不上,那就说明是根据已经得到的序列设计的引物了哈,建议再好好选个地方重新设计引物。
6楼2010-09-16 13:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaqing2

木虫 (著名写手)

用保真酶试试
好好学习,天天向上
7楼2011-04-04 16:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-06 08:13:28
1,多轮巢式PCR
2重新做接头,可以试试B25
3cloneth盒子非常好
8楼2011-04-04 22:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sai00fuji

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-04-06 08:13:46
我前天才开始做3‘race,可能没法给你什么建议,但是说说我的经历说不定能有点帮助。
最开始得到的是400bp的片段,去ncbi上blast,是我要的功能序列。所以准备做3’race。这里提一下,我blast的时候特别注意了一下我的片段是正义还是反义的,结果是反义链,所以我是按照互补序列设计的引物。
我提取的RNA质量不错,像广告图一样的。
然后p出的片段是900bp,应该说是合理的片段范围,现在还没测序,也不太清楚结果。
用的是takara的AMV反转录试剂盒
9楼2011-04-05 22:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换一种效果好的酶重新PCR试试
好好学习,天天向上
10楼2012-05-21 22:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lijunping68 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +9 kkkl_v 2026-08-19 9/450 2026-08-19 19:11 by 菜鸟遥感
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +53 医学老男孩 2026-08-13 118/5900 2026-08-19 18:14 by 医学老男孩
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 3/150 2026-08-19 18:04 by oCMhZAsgNFoO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 4/200 2026-08-19 17:54 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +10 ziyangfang 2026-08-19 11/550 2026-08-19 17:19 by wdc28
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +4 瞬息宇宙 2026-08-15 4/200 2026-08-19 16:23 by allmydream
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
信息提示
请填处理意见