| 查看: 2594 | 回复: 26 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【专题】蛋白新纯化思路探讨 已有14人参与
|
|||
|
蛋白新纯化思路探讨 思路：得到需要纯化的样品中所有杂蛋白的抗体，将这些抗体结合到NHS-活化的Sepharose Fast Flow上，然后再将需要纯化的样品过这个柱子，所有杂蛋白都结合在柱子上，目的蛋白穿透出来。 具体例子：原核表达蛋白纯化 1. 无目的基因的PET28a-BL21，菌体超声破碎后离心分上清和沉淀，将上清拿去免疫兔子，得到针对杂蛋白的抗体，将抗体结合到NHS-活化的Sepharose Fast Flow上，命名这根柱子为X。PET28a-目的蛋白1-BL21诱导表达后，菌体超声破碎后离心分上清和沉淀，将上清过X柱，所有杂蛋白跟相应抗体结合，目的蛋白1穿透出来，实现纯化。 2. 无目的基因的PET28a-BL21，菌体超声破碎后离心分上清和沉淀，将沉淀拿去免疫兔子，得到针对杂蛋白的抗体，将抗体结合到NHS-活化的Sepharose Fast Flow上，命名这根柱子为Y。PET28a-目的蛋白2-BL21诱导表达后，菌体超声破碎后离心分上清和沉淀，沉淀用尿素溶解，复性后过Y柱，所有杂蛋白跟相应抗体结合，目的蛋白2穿透出来，实现纯化。 问题肯定会有很多，我们课题组想尝试这样做一些，请大家给点建议，有哪些需要注意的地方，谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有213人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- AMPK蛋白纯化问题讨论
已经有21人回复
- 请帮忙推荐下蛋白电泳装置， 或洒点蛋白纯化 or PAGE 经验啊！
已经有8人回复
- 如何进一步纯化这个蛋白？
已经有7人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 关于蛋白分离纯化实验设计思路！！！！！！！急急急
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助 小分子量蛋白多肽纯化
已经有12人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化问题！
已经有5人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化
已经有3人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
3楼2010-09-15 16:07:48
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2010-09-15 15:53:57
dianaofyezi
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1660.1
- 散金: 26
- 帖子: 721
- 在线: 67.1小时
- 虫号: 371239
- 注册: 2007-05-14
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:37:11
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:37:11
|
其实我觉得二楼说的很有道理。至于你所想的是否能够成为现实我不加评价，只能说你们有钱倒是可以玩玩！ 从理论上来说菌体蛋白由很多种类，在偶联到纯化的过程中会出现不同程度的竞争或者有些蛋白就是偶联效率比较低的。你过柱子的时候是否一定能够保证纯度达到要求呢？如果无法将纯度保证到90%，那有为什么要用抗体株进行纯化呢？费时费力，不是么？ 从实际经验来看，多种具有抗原表位的物质同时进入动物体内生产抗体的时候，并不是每一种蛋白都能够刺激产生抗体的，有些可能会有若反应或者无反应。你如何规避者部分不产生抗体的抗原反应呢？ 以上至死个人建议。如果你能够做出来就和大家分享下里面的艰辛。 |
4楼2010-09-15 19:03:15
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2010-09-16 10:10:35
