应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
51/1返回列表
查看: 1821  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我是果果

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教连接转化方面的问题 已有4人参与

我的目标片段有1400bp,琼脂糖凝胶电泳时有两条带,相隔很近,据说可能是两个亚型,切胶切不开,只能做连接,但连了几次都没连上,用的是pMD19-T载体,每次都只长出三四个菌落,而且都不是我要的,求助于各位高手!谢谢啦~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-15 15:16:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lu_zl

银虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06: 2010-09-15 23:28:51
我是果果(金币+2): 2010-09-16 09:37:20
我相信楼主不会粗心到用高保真酶去PCR的。问题很可能是你的扩增片段浓度太低了，加大对载体的比例再连接。

还有你的平板中抗生素，IPTG XGAL等等有没有失效的？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-15 15:59:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:28:45
奇怪了，做TA克隆还能有不长的。

酶能不能加A？ 回收的时候是否充分晾干乙醇？

TA克隆随便一连长的满板子都是，建议楼主从头开始反思自己的操作，注意细节问题。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-15 15:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
用的是taq酶么？如果用的pfx扩的需要加A才能连上T载
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-15 15:49:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tj_fjl

新虫 (初入文坛)
我是果果(金币+2): 2010-09-16 09:37:41
连转必须要保证片段的浓度，片段好的话，连接效率就好，你是平端连接，酶切还是重组？
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-16 09:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 271材料工程求调剂 +6 .6lL 2026-03-18 6/300 2026-03-19 15:41 by haoshis
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +17 不知道叫什么！ 2026-03-15 19/950 2026-03-19 15:06 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +10 SUICHILD 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:51 by Delta2012
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +4 ioodiiij 2026-03-17 4/200 2026-03-18 12:36 by Linda Hu
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭