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xzd5517520铜虫 (初入文坛)
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【求助/交流】关于降落pcr的问题！ 已有4人参与
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| 请教各位大侠：什么时候要做降落pcr??还有就是在pcr仪上是怎么设计的？？求教！ |
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yujiaping1
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3楼2010-09-12 22:16:12
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amisking(金币+5):good! 2010-09-12 22:22:38
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降落PCR，主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。这虽然可以通过反复尝试来优化，但费时费力。降落PCR提供了一个较为简易的优化方法。其原理大致是这样的。首先在较高的温度下扩增，此时虽然扩增效率低，但非特异扩增基本没有。随着退火温度的降低，非特异扩增会逐步增多。但由于此时特异的扩增产物已经达到一定的数量优势，因此会对非特异扩增产生强烈的竞争抑制，从而大幅提高PCR的特异性和效率。这一PCR技术已经大量地进入医疗临床应用。现在，以高通量PCR为基础的检测方法、如人的 HLA分型 大多采用这一技术。 一般的PCR仪上，都可以通过每一次循环降低一定退火温度的方式来实现，具体的看一下仪器说明书就明白了，呵呵，不难的。  |
2楼2010-09-12 20:45:01
hongyuan1016
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4楼2010-09-14 16:43:39
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相比之下还是认为二楼的对。非特异的东西会越来越多，而不会被选择掉，PCR的优势（可怕之处）就在于会几何级的增加。 请参考：http://baike.baidu.com/view/2200786.html?tp=4_01 |
5楼2010-09-14 17:01:52
