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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白质提取以后应如何存放才能保证活性不变啊
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wanghr595

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白质提取以后应如何存放才能保证活性不变啊

我想用大肠杆菌BL21大量表达一些酶蛋白，然后要等做完下一步实验才用到这些蛋白，怎么都不能将两步实验的时间放在一起，只能先将蛋白质提取出来保存到用时，但是怎么保存才能保证酶不失效啊？我查了一些文献，好多都是直接用液氮直接冷冻后-20保存，我想知道有没有其他的方法啊？
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1楼 2010-08-30 17:03:14
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-08-30 21:22:43
保持蛋白的活性没有同一的方法，你只能根据蛋白酶的性质进行保存，比如说假如防腐剂，合适的缓冲溶液，冻干，保护剂等。
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52187644
2楼2010-08-30 19:30:54
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
wanghr595(金币+1): 2010-08-31 09:51:44
直接冻在液氮里最好~也可以液氮处理后冻在-80，-20不很保险
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3楼2010-08-30 19:31:24
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
wanghr595(金币+1): 2010-08-31 09:51:40
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-31 12:03:28
引用回帖:
Originally posted by wanghr595 at 2010-08-30 17:03:14:
我想用大肠杆菌BL21大量表达一些酶蛋白，然后要等做完下一步实验才用到这些蛋白，怎么都不能将两步实验的时间放在一起，只能先将蛋白质提取出来保存到用时，但是怎么保存才能保证酶不失效啊？我查了一些文献，好多 ...

基本原则：蛋白浓度应该1mg/ml以上，可以加入30%左右的甘油放入-20进行保存，如果只是一周左右的时间，4度一般也是可以的。
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4楼2010-08-30 19:35:35
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wanghr595

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2010-08-30 19:31:24:
直接冻在液氮里最好~也可以液氮处理后冻在-80，-20不很保险

是啊，上次我直接放在-20了，过了几天发现本来是可溶性蛋白的溶液居然有了沉淀，郁闷坏了！不知道液氮冷冻后放在-80怎么样呢？
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5楼2010-08-31 09:54:50
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wanghr595

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-30 19:35:35:

基本原则：蛋白浓度应该1mg/ml以上，可以加入30%左右的甘油放入-20进行保存，如果只是一周左右的时间，4度一般也是可以的。

谢谢了！
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6楼2010-08-31 09:55:14
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laren_

铜虫 (初入文坛)
冻干
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7楼2010-08-31 10:11:06
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梅闲寒笑

金虫 (正式写手)
冻干，，低温保存，，
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水墨丹青
8楼2010-08-31 15:20:30
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
菌体冻在-20度可以保存很久的
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9楼2010-08-31 15:41:14
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
甘油，低温-80冻存
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会当凌绝顶，一览众山小
10楼2010-08-31 15:53:03
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