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hustxiong

木虫 (正式写手)

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专业: 环境微生物学

[交流] 【求助/交流】关于DGGE，求助

最近初做DGGE，银染后，图谱如下：
（1）点了两个样，每个样两个平行，图中A1,A2 和BI,B2，为何其他泳道也扩散严重，胶制好后过夜室温干燥的。样品量是16微升。缓冲室1*TAE，60度，130V，8.5个小时。
(2) A、B样品实质是同一个样品中提取DNA后，一个用V3区引物，一个用是是V6-V8区引物。
（3）图谱最上面的弧形，难道是边缘效应？
高手请帮助下，非常感谢！

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1楼 2010-08-28 15:20:54

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在雨中

金虫 (著名写手)

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专业: 环境微生物学

★ ★
dhd997(金币+2):最近很活跃，加油啊 2011-01-08 12:22:17

引用回帖:

Originally posted by tsq0126 at 2011-01-06 15:12:14:
各位大侠给出出主意

变性胶的浓度范围45%--65%，胶的浓度是8%，片段是250bp左右，电泳16小时，电压100V，电流40mA。DGGE的图片上下反掉啦，由于拍得太大，点样孔没有拍出来。各位大虾多给意见。

相信楼主 ...

你的PCR产物有非特异扩增呀。相信你是使用的338,518R的V3区引物，如果是这样的话，你的DGGE条件是没有大问题的。图做的不好，跟胶做的好坏关系很大。

[ Last edited by 在雨中 on 2011-1-8 at 10:32 ]