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hustxiong

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于DGGE,求助

最近初做DGGE,银染后,图谱如下:
(1)点了两个样,每个样两个平行,图中A1,A2 和BI,B2,为何其他泳道也扩散严重,胶制好后过夜室温干燥的。样品量是16微升。缓冲室1*TAE,60度,130V,8.5个小时。
(2) A、B样品实质是 同一个样品中提取DNA后, 一个用V3区引物,一个用是是V6-V8区引物。
(3)图谱最上面的弧形,难道是边缘效应?
高手请帮助下,非常感谢!
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tsq0126

金虫 (小有名气)

各位大侠给出出主意

变性胶的浓度范围45%--65%,胶的浓度是8%,片段是250bp左右,电泳16小时,电压100V,电流40mA。DGGE的图片上下反掉啦,由于拍得太大,点样孔没有拍出来。各位大虾多给意见。  

相信楼主的问题已经解决啦,给小弟我出出主意。万分感谢


4楼2011-01-06 15:12:14
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂

hustxiong(金币+1):呵呵 谢谢! 2010-08-28 20:58:39
帮你顶一下吧
坚持能无数次改变人生的风景,因为只要路是对的,就不怕远~~~
2楼2010-08-28 17:36:44
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526378054

金虫 (小有名气)

hustxiong(金币+2): 2010-08-29 15:46:37
是不是胶放置时间太长了?我们一般做好胶后两三个小时就用
3楼2010-08-29 15:27:54
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hustxiong

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by tsq0126 at 2011-01-06 15:12:14:
各位大侠给出出主意

变性胶的浓度范围45%--65%,胶的浓度是8%,片段是250bp左右,电泳16小时,电压100V,电流40mA。DGGE的图片上下反掉啦,由于拍得太大,点样孔没有拍出来。各位大虾多给意见。  

相信楼主 ...

从图上无法看出问题的症结,影响因素太多了。
建议  变性胶 的浓度范围做个调整,试试看
5楼2011-01-07 21:51:42
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