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whisht

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】16S PCR无条带,16S V3区有条带的问题

在做一批污泥的环境样品时,DNA提取后做16S PCR,跑胶发现有的有条带,有的没条带,有的略有拖尾现象,把这些PCR产物统统做16S V3区PCR,结果均都跑出明显的条带,并且条带明亮且较为肥硕,但是条带上方均有一些的拖尾现象。
想请教大家问题出在什么地方,怎样才能通过跑胶跑出出我的16S PCR?
怎样才能使16S V3 PCR条带干净无杂带?

减少16S V3 PCR 中DNA模板的量后,目标条带变淡,但是仍有拖尾现象存在。

[ Last edited by whisht on 2010-8-24 at 15:38 ]
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banhf

新虫 (初入文坛)

16S PCR的跑胶结果没条带的可能是PCR产物浓度较低,电泳后肉眼看不到,有拖尾的可能是浓度过高导致的,可以稀释后再电泳检测。
做16S V3区PCR时可以适当少加点模板,按照PCR的原理,只要体系中有一条DNA模板链存在就可以得到PCR产物,所以PCR体系中的模板大可不必加很多。
2楼2010-08-24 12:37:56
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