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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办 已有20人参与

用TaKaRa的5'Full Race试剂盒扩5’端，目的片段1000bp左右，每次都是内外引物都扩不出任何条带（除了引物二聚体外）。我是严格按照说明书操作的，感觉步骤太长，颠来倒去的到最后什么都没有了，我该怎么办？


谢谢大家了，这是很久以前的帖子了，我早就做出来了，用的TaKaRa的盒子，用的TaKaRa的盒子

[ Last edited by 阳光金鱼唐 on 2011-7-5 at 11:25 ]
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
1楼 2010-08-16 10:33:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

siyuan4671

金虫 (小有名气)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-22 12:56:44
还有，如果片段太难扩，可以考虑Genome walking
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35楼2010-08-21 20:36:35
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十比

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-28 18:25:28
建议重新设计引物，将下游的基因特异引物向前移使扩增产物大小在1000以下为好。你试试吧。
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45楼2011-06-28 15:24:57
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thinka

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
用invitrogen试剂盒吧。做RACE如果碰到不顺的基因，那就要好好研究下PCR的原理了，体系的优化。现在的学生用试剂盒用的都对付不了极端基因了。
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50楼2011-07-05 11:04:04
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普通回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★
silicare(金币+1):有参考价值~ 2010-08-24 12:52:45
5‘RACE确实不好做

RNA（cDNA）质量要有保证

或者引物再优化一下
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2楼2010-08-16 11:54:28
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liyong1981

金虫 (正式写手)
同情下~·~
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3楼2010-08-16 13:48:49
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
silicare(金币+1):这也是常用解决方法~ 2010-08-24 12:53:21
可以换个试剂盒试试 或者重新提取RNA
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4楼2010-08-16 14:02:39
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steamsn

金虫 (小有名气)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-16 16:08:05
LZ, 和我一样啊，我的是RNA的质量不行，而且takara的RACE有点太麻烦，不过没办法，老板没钱阿。
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我命由我不由天
5楼2010-08-16 15:10:10
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
我的RNA还可以，比值2.1，最差的也是1.9多，但就是做不出来，郁闷着呢
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
6楼2010-08-16 16:05:10
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by steamsn at 2010-08-16 15:10:10:
LZ, 和我一样啊，我的是RNA的质量不行，而且takara的RACE有点太麻烦，不过没办法，老板没钱阿。

我的RNA还可以，比值2.1，最差的也是1.9多，但就是做不出来，郁闷着呢 。这试剂盒光骗钱来着
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2302903&pid=1385060&page=1#pid1385060
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
7楼2010-08-16 16:07:20
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steamsn

金虫 (小有名气)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-17 10:54:54
引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-08-16 16:05:10:
我的RNA还可以，比值2.1，最差的也是1.9多，但就是做不出来，郁闷着呢

这个比值不行，电泳结果非常好才行
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我命由我不由天
8楼2010-08-17 08:23:49
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jasco

木虫 (正式写手)
★
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-17 10:54:47
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-18 06:08:41
1、保证rna完整性好，电泳检测
2、因为对rna有去磷去帽子加接头，操作很多，易降解，所以要格外当心操作
3、多设计几条引物再试试
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9楼2010-08-17 09:28:26
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by steamsn at 2010-08-17 08:23:49:

这个比值不行，电泳结果非常好才行

电泳结果3条带啊，没什么扩散或拖带
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
10楼2010-08-17 10:54:38
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