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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-24 11:12:36:

不知道你问题解决了没有啊,我想除了重新提RNA等一些步骤。你已知的序列是多长,是怎么知道的啊,可以先用自己的已知的尽量长的扩扩,相当于做个阳性对照了。还有反转的试剂盒是什么,如果反的比较长用随机引物 ...

我已经扩出了核心片段和3‘端啊,下一步打算用环化法扩5‘端,自己设计个接头5’端磷酸化,再设计2对引物。先试试,不行再换方法。反转录不用试剂盒,买散装的试剂,加自己设计的特异性接头
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
41楼2010-08-24 12:02:55
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nick110

银虫 (小有名气)

阳光金鱼唐(金币+2): 2010-11-28 19:42:49
学习一下
42楼2010-11-28 19:41:17
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hjb2010

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我也是和你用的一样的试剂盒,步骤繁琐,电泳结果多是非特异性条带,不知道是不是RNA的问题,小小的同情一下,加油!!
43楼2011-06-27 19:43:34
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liaowenzhen

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 欢迎交流 2011-06-28 18:25:35
楼主,5‘RACE做不出来的原因可能会有很多,比如说引物的设计得不好,你要扩增的片段结构太复杂(GC含量太高等),做巢式PCR的时候,退火温度没有控制好等等,可以加我Q237667937,希望能够帮到你。
青山不改,绿水长流!
44楼2011-06-28 13:16:13
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十比

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-28 18:25:28
建议重新设计引物,将下游的基因特异引物向前移使扩增产物大小在1000以下为好。你试试吧。
45楼2011-06-28 15:24:57
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ydniu

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
5'RACE用宝生物的盒子扩1k左右的片段是不是太长了?能不能换对引物试试。
再者,我用过这个盒子,感觉重复性的确是有点差,p出来一次之后就在怎么也重复不了了。不过最终还是用那一次的结果拿到了全长。
不要着急,多试试
46楼2011-06-30 09:14:01
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

我已经做出来了
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
47楼2011-06-30 18:30:22
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trees2011

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
用TaKaRa的5'Full Race试剂盒是不是smart技术的那种?  这个时机盒有一定难度!用好了,对于克隆多个基因 5'Full Race很方便省事。
初手最好用invitrogen的5'RACE试剂盒,容易,保准!
学历是铜牌,能力是银牌,人脉是金牌,idea是王牌
48楼2011-07-04 17:08:00
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倔强的投手

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
其实自己做,都算下来的话也不便宜
可以送到公司做啊,结果也很快就能拿到
49楼2011-07-04 19:49:04
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thinka

铜虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
用invitrogen试剂盒吧。做RACE如果碰到不顺的基因,那就要好好研究下PCR的原理了,体系的优化。现在的学生用试剂盒用的都对付不了极端基因了。
50楼2011-07-05 11:04:04
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