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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-24 11:12:36:

不知道你问题解决了没有啊，我想除了重新提RNA等一些步骤。你已知的序列是多长，是怎么知道的啊，可以先用自己的已知的尽量长的扩扩，相当于做个阳性对照了。还有反转的试剂盒是什么，如果反的比较长用随机引物 ...

我已经扩出了核心片段和3‘端啊，下一步打算用环化法扩5‘端，自己设计个接头5’端磷酸化，再设计2对引物。先试试，不行再换方法。反转录不用试剂盒，买散装的试剂，加自己设计的特异性接头
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
41楼2010-08-24 12:02:55
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nick110

银虫 (小有名气)
阳光金鱼唐(金币+2): 2010-11-28 19:42:49
学习一下
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42楼2010-11-28 19:41:17
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hjb2010

新虫 (初入文坛)
★
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我也是和你用的一样的试剂盒，步骤繁琐，电泳结果多是非特异性条带，不知道是不是RNA的问题，小小的同情一下，加油！！
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43楼2011-06-27 19:43:34
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liaowenzhen

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 欢迎交流 2011-06-28 18:25:35
楼主，5‘RACE做不出来的原因可能会有很多，比如说引物的设计得不好，你要扩增的片段结构太复杂（GC含量太高等），做巢式PCR的时候，退火温度没有控制好等等，可以加我Q237667937，希望能够帮到你。
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青山不改，绿水长流！
44楼2011-06-28 13:16:13
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十比

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-28 18:25:28
建议重新设计引物，将下游的基因特异引物向前移使扩增产物大小在1000以下为好。你试试吧。
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45楼2011-06-28 15:24:57
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ydniu

铜虫 (正式写手)
★
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5'RACE用宝生物的盒子扩1k左右的片段是不是太长了？能不能换对引物试试。
再者，我用过这个盒子，感觉重复性的确是有点差，p出来一次之后就在怎么也重复不了了。不过最终还是用那一次的结果拿到了全长。
不要着急，多试试
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46楼2011-06-30 09:14:01
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
我已经做出来了
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
47楼2011-06-30 18:30:22
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trees2011

铜虫 (小有名气)
★
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用TaKaRa的5'Full Race试剂盒是不是smart技术的那种？  这个时机盒有一定难度！用好了，对于克隆多个基因 5'Full Race很方便省事。
初手最好用invitrogen的5'RACE试剂盒，容易，保准！
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学历是铜牌，能力是银牌，人脉是金牌，idea是王牌
48楼2011-07-04 17:08:00
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倔强的投手

新虫 (小有名气)
★
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其实自己做，都算下来的话也不便宜
可以送到公司做啊，结果也很快就能拿到
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49楼2011-07-04 19:49:04
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thinka

铜虫 (著名写手)
★
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用invitrogen试剂盒吧。做RACE如果碰到不顺的基因，那就要好好研究下PCR的原理了，体系的优化。现在的学生用试剂盒用的都对付不了极端基因了。
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50楼2011-07-05 11:04:04
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