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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】5'Race反复做不出来,该怎么办 已有20人参与

用TaKaRa的5'Full Race试剂盒扩5’端,目的片段1000bp左右,每次都是内外引物都扩不出任何条带(除了引物二聚体外)。我是严格按照说明书操作的,感觉步骤太长,颠来倒去的到最后什么都没有了,我该怎么办?


谢谢大家了,这是很久以前的帖子了,我早就做出来了,用的TaKaRa的盒子,用的TaKaRa的盒子

[ Last edited by 阳光金鱼唐 on 2011-7-5 at 11:25 ]
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不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-24 11:12:36:

不知道你问题解决了没有啊,我想除了重新提RNA等一些步骤。你已知的序列是多长,是怎么知道的啊,可以先用自己的已知的尽量长的扩扩,相当于做个阳性对照了。还有反转的试剂盒是什么,如果反的比较长用随机引物 ...

我已经扩出了核心片段和3‘端啊,下一步打算用环化法扩5‘端,自己设计个接头5’端磷酸化,再设计2对引物。先试试,不行再换方法。反转录不用试剂盒,买散装的试剂,加自己设计的特异性接头
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
41楼2010-08-24 12:02:55
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ben1147

木虫 (正式写手)


silicare(金币+1):有参考价值~ 2010-08-24 12:52:45
5‘RACE确实不好做

RNA(cDNA)质量要有保证

或者引物再优化一下
2楼2010-08-16 11:54:28
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liyong1981

金虫 (正式写手)


同情下~·~
3楼2010-08-16 13:48:49
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


silicare(金币+1):这也是常用解决方法~ 2010-08-24 12:53:21
可以换个试剂盒试试 或者重新提取RNA
4楼2010-08-16 14:02:39
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