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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办已有20人参与

用TaKaRa的5'Full Race试剂盒扩5’端，目的片段1000bp左右，每次都是内外引物都扩不出任何条带（除了引物二聚体外）。我是严格按照说明书操作的，感觉步骤太长，颠来倒去的到最后什么都没有了，我该怎么办？


谢谢大家了，这是很久以前的帖子了，我早就做出来了，用的TaKaRa的盒子，用的TaKaRa的盒子

[ Last edited by 阳光金鱼唐 on 2011-7-5 at 11:25 ]
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
1楼2010-08-16 10:33:02
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
我的RNA还可以，比值2.1，最差的也是1.9多，但就是做不出来，郁闷着呢
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
6楼2010-08-16 16:05:10
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by steamsn at 2010-08-16 15:10:10:
LZ, 和我一样啊，我的是RNA的质量不行，而且takara的RACE有点太麻烦，不过没办法，老板没钱阿。

我的RNA还可以，比值2.1，最差的也是1.9多，但就是做不出来，郁闷着呢 。这试剂盒光骗钱来着
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2302903&pid=1385060&page=1#pid1385060
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
7楼2010-08-16 16:07:20
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by steamsn at 2010-08-17 08:23:49:

这个比值不行，电泳结果非常好才行

电泳结果3条带啊，没什么扩散或拖带
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
10楼2010-08-17 10:54:38
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-17 21:56:10:
不用试剂盒，用最老的方法，5'RACE效果挺好的

什么方法？环化法吗？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
12楼2010-08-17 21:58:28
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by steamsn at 2010-08-18 08:02:12:

你提取的总RNA直接RT-PCR扩中间片断能扩出来吗,另外,建议你如果经费比较充足的话,换CLONTECH的试剂盒来做,这个要简单些,不需要多次抽提.

CLONTECH的试剂盒多少钱一个？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
14楼2010-08-18 12:16:09
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by lhwei1987 at 2010-08-19 12:02:33:
同病相怜啊，我的两个基因5‘也出不来，比较悲剧，RNA没问题，清晰三条带，3’没问题，都是一次就出来，试剂盒是CLONTECH，也应该没问题，做其他的基因也是一次就搞定，只能说比较悲剧了；估计是RNA含量低，5’降 ...

是吗？我也是3’一次就出来了。现在5’做了3次了，没出来。别人教我一种最原始的方法，我还没试呢
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
20楼2010-08-19 15:10:37
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:27:23:
当初扩了六个基因全部是用经典RACE做的，应该没问题的

是吗，什么方法呢？想请教一下，不知道愿意赐教不？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
21楼2010-08-19 15:12:16
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:26:38:
还是用经典RACE吧，在PCR技术实验指南那本书里有介绍。合成几个接头引物Q0，Q1，Q2，比试剂盒便宜。

是不就是环化法呢？我还没看书
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
22楼2010-08-19 15:13:21
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
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Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-20 19:37:25:

就是经典5‘RACE，提取总RNA，反转录，加接头引物，然后就可以扩了，效果挺好的，一直用这个

能详细的讲下吗？不去帽子和磷酸化，也不是环化法，接头怎么接上去？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
24楼2010-08-20 20:44:11
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