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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:27:23:
当初扩了六个基因全部是用经典RACE做的，应该没问题的

是吗，什么方法呢？想请教一下，不知道愿意赐教不？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
21楼2010-08-19 15:12:16
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:26:38:
还是用经典RACE吧，在PCR技术实验指南那本书里有介绍。合成几个接头引物Q0，Q1，Q2，比试剂盒便宜。

是不就是环化法呢？我还没看书
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
22楼2010-08-19 15:13:21
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+2):活跃 鼓励一下 常来 2010-08-20 20:21:38
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-20 20:42:55
引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-17 21:56:10:
不用试剂盒，用最老的方法，5'RACE效果挺好的

就是经典5‘RACE，提取总RNA，反转录，加接头引物，然后就可以扩了，效果挺好的，一直用这个
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23楼2010-08-20 19:37:25
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-20 19:37:25:

就是经典5‘RACE，提取总RNA，反转录，加接头引物，然后就可以扩了，效果挺好的，一直用这个

能详细的讲下吗？不去帽子和磷酸化，也不是环化法，接头怎么接上去？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
24楼2010-08-20 20:44:11
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yzl19880814

至尊木虫 (知名作家)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-21 11:04:08
自己找一找反应机理方面的问题
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细节决定成败
25楼2010-08-20 21:27:13
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pidou

木虫 (正式写手)
★
看天(金币+1):夜里还不睡？ 2010-08-21 01:06:36
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-21 11:04:24
建议重提RNA，只要保证RNA的质量，一般试剂盒都没什么问题，所以唯一有问题的就是RNA了
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26楼2010-08-21 00:04:28
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fanggang1101

金虫 (小有名气)
★
看天(金币+1):注意身体 怎么不睡觉 2010-08-21 01:07:00
同上
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天道酬勤
27楼2010-08-21 00:53:35
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zhangzhiweia

铁杆木虫 (职业作家)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-21 11:03:35
祝福一切顺利
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28楼2010-08-21 06:00:44
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danny0426

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5):新人鼓励 以后常来哦 2010-08-21 16:27:00
做RACE，RNA质量是重中之重，其次就是引物的设计，我用的是invitrogen的5'RACE试剂盒，做了两个ORF的，全做出来了！
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29楼2010-08-21 15:22:48
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rodickholm

木虫 (正式写手)
降温！。。
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30楼2010-08-21 16:03:15
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