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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:27:23:
当初扩了六个基因全部是用经典RACE做的,应该没问题的

是吗,什么方法呢?想请教一下,不知道愿意赐教不?
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
21楼2010-08-19 15:12:16
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:26:38:
还是用经典RACE吧,在PCR技术实验指南那本书里有介绍。合成几个接头引物Q0,Q1,Q2,比试剂盒便宜。

是不就是环化法呢?我还没看书
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
22楼2010-08-19 15:13:21
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)

★ ★
看天(金币+2):活跃 鼓励一下 常来 2010-08-20 20:21:38
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-20 20:42:55
引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-17 21:56:10:
不用试剂盒,用最老的方法,5'RACE效果挺好的

就是经典5‘RACE,提取总RNA,反转录,加接头引物,然后就可以扩了,效果挺好的,一直用这个
23楼2010-08-20 19:37:25
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-20 19:37:25:

就是经典5‘RACE,提取总RNA,反转录,加接头引物,然后就可以扩了,效果挺好的,一直用这个

能详细的讲下吗?不去帽子和磷酸化,也不是环化法,接头怎么接上去?
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
24楼2010-08-20 20:44:11
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yzl19880814

至尊木虫 (知名作家)

阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-21 11:04:08
自己找一找反应机理方面的问题
细节决定成败
25楼2010-08-20 21:27:13
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pidou

木虫 (正式写手)


看天(金币+1):夜里还不睡? 2010-08-21 01:06:36
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-21 11:04:24
建议重提RNA,只要保证RNA的质量,一般试剂盒都没什么问题,所以唯一有问题的就是RNA了
26楼2010-08-21 00:04:28
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fanggang1101

金虫 (小有名气)


看天(金币+1):注意身体 怎么不睡觉 2010-08-21 01:07:00
同上
天道酬勤
27楼2010-08-21 00:53:35
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zhangzhiweia

铁杆木虫 (职业作家)

阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-21 11:03:35
祝福一切顺利
28楼2010-08-21 06:00:44
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danny0426

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5):新人鼓励 以后常来哦 2010-08-21 16:27:00
做RACE,RNA质量是重中之重,其次就是引物的设计,我用的是invitrogen的5'RACE试剂盒,做了两个ORF的,全做出来了!
29楼2010-08-21 15:22:48
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rodickholm

木虫 (正式写手)

降温!。。
30楼2010-08-21 16:03:15
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