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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-17 21:59:35
不用试剂盒，用最老的方法，5'RACE效果挺好的
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11楼2010-08-17 21:56:10
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-17 21:56:10:
不用试剂盒，用最老的方法，5'RACE效果挺好的

什么方法？环化法吗？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
12楼2010-08-17 21:58:28
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steamsn

金虫 (小有名气)
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-19 10:45:40
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-19 16:11:04
引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-08-17 10:54:38:

电泳结果3条带啊，没什么扩散或拖带

你提取的总RNA直接RT-PCR扩中间片断能扩出来吗,另外,建议你如果经费比较充足的话,换CLONTECH的试剂盒来做,这个要简单些,不需要多次抽提.
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我命由我不由天
13楼2010-08-18 08:02:12
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by steamsn at 2010-08-18 08:02:12:

你提取的总RNA直接RT-PCR扩中间片断能扩出来吗,另外,建议你如果经费比较充足的话,换CLONTECH的试剂盒来做,这个要简单些,不需要多次抽提.

CLONTECH的试剂盒多少钱一个？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
14楼2010-08-18 12:16:09
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steamsn

金虫 (小有名气)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-19 15:11:10
引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-08-18 12:16:09:

CLONTECH的试剂盒多少钱一个？

好像不到8千多吧,差不多这个价.
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我命由我不由天
15楼2010-08-19 08:22:55
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genewind

金虫 (小有名气)
还是用经典RACE吧，在PCR技术实验指南那本书里有介绍。合成几个接头引物Q0，Q1，Q2，比试剂盒便宜。
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16楼2010-08-19 10:26:38
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genewind

金虫 (小有名气)
当初扩了六个基因全部是用经典RACE做的，应该没问题的
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17楼2010-08-19 10:27:23
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marsfree
18楼2010-08-19 10:52:38
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
阳光金鱼唐(金币+1): 2010-08-19 15:08:56
同病相怜啊，我的两个基因5‘也出不来，比较悲剧，RNA没问题，清晰三条带，3’没问题，都是一次就出来，试剂盒是CLONTECH，也应该没问题，做其他的基因也是一次就搞定，只能说比较悲剧了；估计是RNA含量低，5’降解了，或者5‘有特殊结构，接头连不上...........
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19楼2010-08-19 12:02:33
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-08-19 12:02:33:
同病相怜啊，我的两个基因5‘也出不来，比较悲剧，RNA没问题，清晰三条带，3’没问题，都是一次就出来，试剂盒是CLONTECH，也应该没问题，做其他的基因也是一次就搞定，只能说比较悲剧了；估计是RNA含量低，5’降 ...

是吗？我也是3’一次就出来了。现在5’做了3次了，没出来。别人教我一种最原始的方法，我还没试呢
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
20楼2010-08-19 15:10:37
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