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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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qwertY23

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜: 本版禁止一切形式的广告，先提醒一次，请勿再发！ 2011-11-29 17:35:49
5段是很难的 ，所以需要提纯RNA的，不过，有些公司就是可以做的，就像我们实验室就可以代做。毕竟常年做，有经验。尤其是失败的经验，。
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实验代做，技术服务，race，DGGE，wb，QPCR.流式及免疫组化
51楼2011-11-29 16:35:09
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
挖坟哇，大家很热情阿，楼主问题解决了也要说下，和大家分享下成功的经验，不要有问题才想到来问
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52楼2011-12-10 08:21:28
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
5race不好做哦。我用的是英韦创津的试剂盒，做了三次都不行。不过有的人说很好用
我也不知道该怎么办了
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好好学习，天天向上
53楼2012-05-20 21:57:15
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dongfang12

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2422718楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2011-06-30 18:30:22:
我已经做出来了

请教，你怎么克的5‘RACE 的，我做了好久都不能拿到全长啊，真是郁闷惨了
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54楼2012-05-22 12:46:21
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2456558楼: Originally posted by dongfang12 at 2012-05-22 12:46:21:
请教，你怎么克的5‘RACE 的，我做了好久都不能拿到全长啊，真是郁闷惨了

操作要规范，一定要无菌操作，无RNA酶，退火温度用这个软件计算，在这个基础上减去5度，不放心就试试这个附近的温度http://sky.scnu.edu.cn/life/teac ... que/pcr_counter.htm
用平时的经验算退火温度做不出来的。
还有，PCR用的是高保真酶，我用的是TAKARA的盒子，配套的酶做不出来，换了高保真的酶就做出来了
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
55楼2012-05-22 15:11:25
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dongfang12

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
内容已删除
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56楼2012-05-23 14:00:03
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2456667楼: Originally posted by dongfang12 at 2012-05-23 14:00:03:
那这样的话，退货温度岂不是很低？达不到65度以上？这样也没有关系吗

为什么非要达到65度以上，你用的clonteck的盒子吗，降落PCR？
用TAKARA的话就用这个计算退火温度，的确比平时低一点，但做的出来
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
57楼2012-05-24 10:10:21
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dongfang12

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2456737楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2012-05-24 10:10:21
为什么非要达到65度以上，你用的clonteck的盒子吗，降落PCR？
用TAKARA的话就用这个计算退火温度，的确比平时低一点，但做的出来...

是的，用的cloneteck的盒子。。
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58楼2012-05-27 12:23:09
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
TaKaRa的5'Full Race试剂盒好用吗？楼主既然已经做出来了，能分享一下经验吗？
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关关雎鸠，在河之洲
59楼2012-05-31 09:09:18
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
1433062楼: Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-17 21:56:10
不用试剂盒，用最老的方法，5'RACE效果挺好的

这位GG能给我点经验吗
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关关雎鸠，在河之洲
60楼2012-05-31 09:14:30
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