1440558楼: Originally posted by steamsn at 2010-08-18 08:02:12
你提取的总RNA直接RT-PCR扩中间片断能扩出来吗,另外,建议你如果经费比较充足的话,换CLONTECH的试剂盒来做,这个要简单些,不需要多次抽提....

1507175楼: Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:27:23
当初扩了六个基因全部是用经典RACE做的，应该没问题的

1633758楼: Originally posted by danny0426 at 2010-08-21 15:22:48
做RACE，RNA质量是重中之重，其次就是引物的设计，我用的是invitrogen的5'RACE试剂盒，做了两个ORF的，全做出来了！

2456737楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2012-05-24 10:10:21
为什么非要达到65度以上，你用的clonteck的盒子吗，降落PCR？
用TAKARA的话就用这个计算退火温度，的确比平时低一点，但做的出来...

1602575楼: Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-20 19:37:25
就是经典5‘RACE，提取总RNA，反转录，加接头引物，然后就可以扩了，效果挺好的，一直用这个...

2463744楼: Originally posted by oceanpig at 2012-08-21 08:56:51
楼主分享一下成功的具体步骤啊，小弟现在正做这方面实验呢，谢谢！还有就是TAKARA试剂盒大约要多少钱啊？

2422718楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2011-06-30 18:30:22
我已经做出来了

19楼: Originally posted by lhwei1987 at 2010-08-19 12:02:33
同病相怜啊，我的两个基因5‘也出不来，比较悲剧，RNA没问题，清晰三条带，3’没问题，都是一次就出来，试剂盒是CLONTECH，也应该没问题，做其他的基因也是一次就搞定，只能说比较悲剧了；估计是RNA含量低，5’降解 ...

26楼: Originally posted by pidou at 2010-08-21 00:04:28
建议重提RNA，只要保证RNA的质量，一般试剂盒都没什么问题，所以唯一有问题的就是RNA了