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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
1440558楼: Originally posted by steamsn at 2010-08-18 08:02:12
你提取的总RNA直接RT-PCR扩中间片断能扩出来吗,另外,建议你如果经费比较充足的话,换CLONTECH的试剂盒来做,这个要简单些,不需要多次抽提....

CLONTECH的试剂盒的试剂盒很好用吗？大约多少钱？求GG帮助
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关关雎鸠，在河之洲
61楼2012-05-31 09:15:22
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
1507175楼: Originally posted by genewind at 2010-08-19 10:27:23
当初扩了六个基因全部是用经典RACE做的，应该没问题的

能给我也传授点经验吗？可以给我发站内信吗
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关关雎鸠，在河之洲
62楼2012-05-31 09:16:22
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
1633758楼: Originally posted by danny0426 at 2010-08-21 15:22:48
做RACE，RNA质量是重中之重，其次就是引物的设计，我用的是invitrogen的5'RACE试剂盒，做了两个ORF的，全做出来了！

invitrogen的5'RACE试剂盒从一千的地方就可以扩吗？大约多少钱一个呢
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关关雎鸠，在河之洲
63楼2012-05-31 09:18:25
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yananhl

银虫 (小有名气)
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2456737楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2012-05-24 10:10:21
为什么非要达到65度以上，你用的clonteck的盒子吗，降落PCR？
用TAKARA的话就用这个计算退火温度，的确比平时低一点，但做的出来...

传统的方法做不出来么，不用试剂盒的？
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64楼2012-07-15 13:16:52
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yananhl

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1602575楼: Originally posted by 大白菜123789 at 2010-08-20 19:37:25
就是经典5‘RACE，提取总RNA，反转录，加接头引物，然后就可以扩了，效果挺好的，一直用这个...

真的可以吗？
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65楼2012-07-15 13:26:10
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oceanpig

铁虫 (小有名气)
★
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楼主分享一下成功的具体步骤啊，小弟现在正做这方面实验呢，谢谢！还有就是TAKARA试剂盒大约要多少钱啊？
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66楼2012-08-21 08:56:51
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2463744楼: Originally posted by oceanpig at 2012-08-21 08:56:51
楼主分享一下成功的具体步骤啊，小弟现在正做这方面实验呢，谢谢！还有就是TAKARA试剂盒大约要多少钱啊？

5000多。步骤参照说明书
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
67楼2012-08-21 09:24:04
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caoqianleo

铁虫 (初入文坛)
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2422718楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2011-06-30 18:30:22
我已经做出来了

楼主，我最近也在做5’RACE，想请教一下你是用什么方法做出来的呢？是试剂盒还是自己做的呢？谢谢啦
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68楼2012-11-08 11:49:00
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suguolian

新虫 (初入文坛)
★
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19楼: Originally posted by lhwei1987 at 2010-08-19 12:02:33
同病相怜啊，我的两个基因5‘也出不来，比较悲剧，RNA没问题，清晰三条带，3’没问题，都是一次就出来，试剂盒是CLONTECH，也应该没问题，做其他的基因也是一次就搞定，只能说比较悲剧了；估计是RNA含量低，5’降解 ...

我3‘做了两次都没结果，现在重新设计引物，请问大侠具体要注意哪些问题，请多多指导
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69楼2013-09-28 22:49:26
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suguolian

新虫 (初入文坛)
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26楼: Originally posted by pidou at 2010-08-21 00:04:28
建议重提RNA，只要保证RNA的质量，一般试剂盒都没什么问题，所以唯一有问题的就是RNA了

是不是检测RNA质量都要进行OD值检测和电泳检测啊？急求，请大侠指导
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70楼2013-09-28 22:52:34
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