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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白上柱后洗脱不了
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wbx0412

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】蛋白上柱后洗脱不了 已有4人参与

我初学蛋白的分离纯化的。最近用DEAE Sepharose FF纯化一种酶（PI=4左右），NaCl 0-1M线性梯度洗脱，缓冲液为PBS（已经试过几个PH和几种离子强度）。上样后我的蛋白怎么都洗不下来，只能用1M的NaOH才可以顺利洗脱。请教这是为什么啊？我下一步应该怎么做？
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1楼 2010-08-12 11:02:37
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yaojc

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
逐步加大盐的浓度
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专注、专心、专业
3楼2010-08-12 14:19:38
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cpu2004

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-13 08:20:48
2或3M的NaCl试过没？
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2楼2010-08-12 14:18:11
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-13 08:20:57
诶
还真是个悲剧，弱的挂上去都洗不下来了。

或其他弱阴离子柱试试，把pH调的离 PI 近一些。
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5楼2010-08-13 00:45:37
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