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wbx0412

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】蛋白上柱后洗脱不了 已有4人参与

我初学蛋白的分离纯化的。最近用DEAE Sepharose FF纯化一种酶(PI=4左右),NaCl 0-1M线性梯度洗脱,缓冲液为PBS(已经试过几个PH和几种离子强度)。上样后我的蛋白怎么都洗不下来,只能用1M的NaOH才可以顺利洗脱。请教这是为什么啊?我下一步应该怎么做?
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cpu2004

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-13 08:20:48
2或3M的NaCl试过没?
2楼2010-08-12 14:18:11
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yaojc

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
逐步加大盐的浓度
专注、专心、专业
3楼2010-08-12 14:19:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
盐的浓度过低.
4楼2010-08-12 16:55:06
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-13 08:20:57

还真是个悲剧,弱的挂上去都洗不下来了。

或其他弱阴离子柱试试,把pH调的离 PI 近一些。
5楼2010-08-13 00:45:37
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