24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1753  |  回复: 6

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒提不出来什么原因? 已有1人参与

最近连接T载体后,做菌液PCR有目的条带,提质粒跑电泳带很微弱或是没有,但做质粒PCR条带很亮。不知是什么原因。送测序公司,测序公司也说提不出质粒。郁闷中。。。有那位大侠帮帮,不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

idealhy

金虫 (小有名气)

小虫子666(金币+1): 2010-08-10 17:17:52
小虫子666(金币+1):和他同一批次做的转化的其他基因都能提出质粒,而且测序正确,但这个就是提不出来,送了4次测序公司也说提不出来。不知原因。 2010-08-10 17:19:56
会不会是质粒浓度不够,pcr只要有几个拷贝就能扩增的,但是提取质粒要大量的。
我个人建议,是否抗生素浓度没控制好或者忘记加了?再就是你质粒抽提的问题。。
2楼2010-08-10 17:03:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:13:17
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:15:05
很可能是目的片段较长,连接没成功。再做次连接试试。
3楼2010-08-10 18:18:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:13:05
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:14:59
换个受体菌
4楼2010-08-10 18:37:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:13:02
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:14:54
很可能是杂菌
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2010-08-13 20:23:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:12:58
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:14:48
引用回帖:
Originally posted by 小虫子666 at 2010-08-10 16:42:36:
最近连接T载体后,做菌液PCR有目的条带,提质粒跑电泳带很微弱或是没有,但做质粒PCR条带很亮。不知是什么原因。送测序公司,测序公司也说提不出质粒。郁闷中。。。有那位大侠帮帮,不胜感激!

杂菌的可能性比较大,最好重做。你酶切一下,看看能不能切出来?
6楼2010-08-13 21:53:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麻花13

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
小丹木木(金币+2): 多多交流 2012-03-06 10:51:17
1 建议多做几管,在提取过程前期,每管按照原来的方案添加试剂,然后以此将每管通过一个收集柱,这样就起到了浓缩的作用
2 建议在摇菌时,测一下OD值,当然,在OD到达最高时提质粒最好(以前做过,OD在到达最高后,会下降,表观为菌液变得清澈,并出现絮状沉淀,个人认为只是细菌大规模死亡积聚造成)
3 说了那么多,其实其关键作用的还是菌活力本身,如果不行,建议换菌
7楼2012-03-06 10:33:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小虫子666 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +21 hualkop 2026-04-12 22/1100 2026-04-14 17:44 by lhj2009
[考研] 302分求调剂 +10 凡语祈愿 2026-04-08 11/550 2026-04-14 16:50 by jiangguiquan11
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +19 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 20/1000 2026-04-14 16:03 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 招收有机化学、化工,药学,食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
信息提示
请填处理意见