Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1754  |  回复: 6

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒提不出来什么原因? 已有1人参与

最近连接T载体后,做菌液PCR有目的条带,提质粒跑电泳带很微弱或是没有,但做质粒PCR条带很亮。不知是什么原因。送测序公司,测序公司也说提不出质粒。郁闷中。。。有那位大侠帮帮,不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

idealhy

金虫 (小有名气)

小虫子666(金币+1): 2010-08-10 17:17:52
小虫子666(金币+1):和他同一批次做的转化的其他基因都能提出质粒,而且测序正确,但这个就是提不出来,送了4次测序公司也说提不出来。不知原因。 2010-08-10 17:19:56
会不会是质粒浓度不够,pcr只要有几个拷贝就能扩增的,但是提取质粒要大量的。
我个人建议,是否抗生素浓度没控制好或者忘记加了?再就是你质粒抽提的问题。。
2楼2010-08-10 17:03:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:13:17
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:15:05
很可能是目的片段较长,连接没成功。再做次连接试试。
3楼2010-08-10 18:18:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:13:05
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:14:59
换个受体菌
4楼2010-08-10 18:37:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:13:02
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:14:54
很可能是杂菌
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2010-08-13 20:23:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)

小虫子666(金币+1): 2010-08-15 09:12:58
小虫子666(金币+1):一人再送个 2010-08-15 09:14:48
引用回帖:
Originally posted by 小虫子666 at 2010-08-10 16:42:36:
最近连接T载体后,做菌液PCR有目的条带,提质粒跑电泳带很微弱或是没有,但做质粒PCR条带很亮。不知是什么原因。送测序公司,测序公司也说提不出质粒。郁闷中。。。有那位大侠帮帮,不胜感激!

杂菌的可能性比较大,最好重做。你酶切一下,看看能不能切出来?
6楼2010-08-13 21:53:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麻花13

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
小丹木木(金币+2): 多多交流 2012-03-06 10:51:17
1 建议多做几管,在提取过程前期,每管按照原来的方案添加试剂,然后以此将每管通过一个收集柱,这样就起到了浓缩的作用
2 建议在摇菌时,测一下OD值,当然,在OD到达最高时提质粒最好(以前做过,OD在到达最高后,会下降,表观为菌液变得清澈,并出现絮状沉淀,个人认为只是细菌大规模死亡积聚造成)
3 说了那么多,其实其关键作用的还是菌活力本身,如果不行,建议换菌
7楼2012-03-06 10:33:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小虫子666 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂学校 +11 不会吃肉 2026-04-13 12/600 2026-04-14 19:38 by Art1977
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +7 lzmk 2026-04-14 7/350 2026-04-14 17:02 by lihaoda1994
[考研] 化学070300 求调剂 +23 哈哈哈^_^ 2026-04-12 23/1150 2026-04-14 16:30 by zhouxiaoyu
[考研] 复试调剂 +18 积极向上; 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 302求调剂 +10 易!? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 346,工科0854求调剂,专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学, +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 招收有机化学、化工,药学,食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
信息提示
请填处理意见