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qzhaiyan

木虫 (著名写手)

小胖子

[交流] 【求助/交流】柱上酶切问题 已有2人参与

我用thrombin酶在Ni柱上酶切GB1蛋白,低浓度咪唑能把GB1蛋白洗脱下来,再用250mM咪唑洗脱目的蛋白,结果蛋白全沉在Ni柱上了,请问这是什么原因啊?
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noheartman

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是由于酶切后缺少融合蛋白的保护,你的目的蛋白失去稳定的结构而沉淀了啊,融合表达目的蛋白有时候就会遇到这样的情况,我的用thrombin酶切后直接沉淀,如果你的目的蛋白容易聚集或沉淀,建议从头表达或真核吧,也许还有条活路。
2楼2010-08-04 15:41:12
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看不懂LZ的描述

我也是用Thrombin在Ni上酶切目的蛋白。是用20mM咪唑上样,50mM的咪唑washing。然后换到cleavage buffer中,加入Thrombin 4℃下过夜酶切,效果很不错。
3楼2010-08-04 18:06:31
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