应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】柱上酶切问题
31/1返回列表
查看: 1180  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qzhaiyan

木虫 (著名写手)

小胖子

[交流] 【求助/交流】柱上酶切问题 已有2人参与

我用thrombin酶在Ni柱上酶切GB1蛋白，低浓度咪唑能把GB1蛋白洗脱下来，再用250mM咪唑洗脱目的蛋白，结果蛋白全沉在Ni柱上了，请问这是什么原因啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-04 14:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

noheartman

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是由于酶切后缺少融合蛋白的保护，你的目的蛋白失去稳定的结构而沉淀了啊，融合表达目的蛋白有时候就会遇到这样的情况，我的用thrombin酶切后直接沉淀，如果你的目的蛋白容易聚集或沉淀，建议从头表达或真核吧，也许还有条活路。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-08-04 15:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不懂LZ的描述

我也是用Thrombin在Ni上酶切目的蛋白。是用20mM咪唑上样，50mM的咪唑washing。然后换到cleavage buffer中，加入Thrombin 4℃下过夜酶切，效果很不错。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-04 18:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qzhaiyan 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭