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ymzfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR问题 已有15人参与

最近比较郁闷,将构建一个基因的表达载体,用的载体是PBI121,转化大肠杆菌后,菌落PCR检测有阳性菌落,用空的PBI121做对照的没有检测到目的片段,但是提质粒后进行PCR和BamH1和Xba1双酶切检测都没有结果,反复做了几次都是这样。
是不是我的目的片段转化进了大肠杆菌基因组中,但并没有和PBI121载体连接上,从而造成了这种情况?
有哪位知道不?谢谢
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果质粒PCR结果为阴性可以这样分析:agrose gel 电泳检查质粒提取质量,如果有质粒条带,很大可能是引物合成有问题导致酶切位点,你可以测序看看。
7楼2010-08-04 09:50:28
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