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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选 已有6人参与

Sample Text
做蓝白斑筛选的时候，可不可以把IPTG 和XGal和相应的抗生素一起加到培养基里，然后在直接倒板，涂菌。我觉得这样可能不行，因为每个实验手册中都没有这样这样写过，但是我不知道为什么。请大家指教。
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1楼 2010-07-30 16:42:49
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 黎亚丽 at 2010-07-30 16:42:49:
Sample Text
做蓝白斑筛选的时候，可不可以把IPTG 和XGal和相应的抗生素一起加到培养基里，然后在直接倒板，涂菌。我觉得这样可能不行，因为每个实验手册中都没有这样这样写过，但是我不知 ...

现在想起一个原因：就是最后转化产物要涂到平板表层，如果IPTG 和XGal和培养基一起混合直接倒板，转化产物就不能充分和他们两个作用，从而不能筛选出阳性克隆。
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2楼2010-07-30 16:50:45
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-30 17:34:21
我一般都是加氨苄倒板，其余的都是涂布的
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3楼2010-07-30 16:52:06
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-07-30 16:52:06:
我一般都是加氨苄倒板，其余的都是涂布的

是，抗生素是和培养基一起混合加，别的都是涂布。
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4楼2010-07-30 16:56:07
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-07-30 17:34:30
也是可以的啊！不过我一直都是涂

LB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度      1％（W /V）            Tryptone
       平板培养基                      0.5％（W/V）          Yeast Extract
                                                1％（W/V）              NaCl
                                              0.1mg/mL                 Ampicillin
                                               0.5％（W /V）          IPTG
                                                0.04mg/mL                X-Gal
                                               1.5％（W /V）           Agar
      □配制量 1L
  □配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                             Tryptone                        10g
                   Yeast Extract                  5g
                                                              NaCl                            10g
                      2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                     3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
                     4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
                    5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
                    6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。
                   7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
                   8. 4℃保存平板。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-07-30 17:05:40
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-07-30 17:05:40:
也是可以的啊！不过我一直都是涂

LB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度      1％（W /V）            Tryptone
       平板培养基                      0.5％（W/V）          Yeast Extract
                  ...

谢谢！
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6楼2010-07-30 17:10:22
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zxping11230

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
现用现加比较节约，Xgal是很贵的
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快乐的科研
7楼2010-07-30 17:16:26
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zxping11230 at 2010-07-30 17:16:26:
现用现加比较节约，Xgal是很贵的

哦，也是。
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8楼2010-07-30 17:19:08
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
可以的~
没有什么影响，我们平时都是这样子做的~
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2010-07-30 20:16:27
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-31 05:44:06
这两种东西都是为了使假阳性显示蓝斑，因为菌就长在表面，所以在表面涂一点足够了，加到培养基里肯定是没有问题的，但是很浪费。
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10楼2010-07-30 20:41:44
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