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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选 已有6人参与

Sample Text
做蓝白斑筛选的时候,可不可以把IPTG 和XGal和相应的抗生素一起加到培养基里,然后在直接倒板,涂菌。我觉得这样可能不行,因为每个实验手册中都没有这样这样写过,但是我不知道为什么。请大家指教。
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-07-30 17:34:30
也是可以的啊!不过我一直都是涂

LB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度      1%(W /V)            Tryptone
       平板培养基                      0.5%(W/V)          Yeast Extract
                                                1%(W/V)              NaCl
                                              0.1mg/mL                 Ampicillin
                                               0.5%(W /V)          IPTG
                                                0.04mg/mL                X-Gal
                                               1.5%(W /V)           Agar
      □配制量 1L
  □配置方法 1. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                             Tryptone                        10g
                   Yeast Extract                  5g
                                                              NaCl                            10g
                      2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                     3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
                     4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
                    5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
                    6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。
                   7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。
                   8. 4℃保存平板。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-07-30 17:05:40
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 黎亚丽 at 2010-07-30 16:42:49:
Sample Text
做蓝白斑筛选的时候,可不可以把IPTG 和XGal和相应的抗生素一起加到培养基里,然后在直接倒板,涂菌。我觉得这样可能不行,因为每个实验手册中都没有这样这样写过,但是我不知 ...

现在想起一个原因:就是最后转化产物要涂到平板表层,如果IPTG 和XGal和培养基一起混合直接倒板,转化产物就不能充分和他们两个作用,从而不能筛选出阳性克隆。
2楼2010-07-30 16:50:45
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陈思容

铜虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-30 17:34:21
我一般都是加氨苄倒板,其余的都是涂布的
3楼2010-07-30 16:52:06
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-07-30 16:52:06:
我一般都是加氨苄倒板,其余的都是涂布的

是,抗生素是和培养基一起混合加,别的都是涂布。
4楼2010-07-30 16:56:07
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