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wyandck

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么验证我的RNA能不能用? 已有3人参与

我原来一直用试剂盒提我材料成苗根上的RNA的,都是两条带,还不错。这几天我要提胚根上的RNA,用的是同样的方法,电泳检测却没有带了。我就反转录了一下,然后用actin基因引物扩了一下,竟然有带,而且带挺亮。我就又怀疑是不是我的材料中有DNA没有除净呀,我就加了DNase I,但是看有的资料上说DNase I可以降解DNA对后续反应的污染,但是有的资料上说它降解的DNA产物为200bp的2倍,那岂不是仍然有可能在后续反应中作为模板?我准备找一管原来提的DNA样,和我提的RNA一起,都加入DNase I,然后RT-PCR,如果都有带,说明用DNase I降解DNA是不行的,如果DNA的无带,而RNA的样有带,哈哈,是不是说明我的RNA虽然检测不到,但是是痕量,仍然能扩增,不知我的想法对不对?
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎交流! 2010-07-25 21:21:42
引用回帖:
Originally posted by wyandck at 2010-07-25 17:10:32:
我原来一直用试剂盒提我材料成苗根上的RNA的,都是两条带,还不错。这几天我要提胚根上的RNA,用的是同样的方法,电泳检测却没有带了。我就反转录了一下,然后用actin基因引物扩了一下,竟然有带,而且带挺亮。我 ...

楼主的方案是可以的,但是DNA不要太多,不然降解不完全。还有消化完后,一定要回收,不然都会没带呵呵。而且你用actin扩出来带后,不一定扩出你的目的基因。引物丰度会比actin低很多
4楼2010-07-25 20:08:37
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-25 19:28:04
定量看看,OD260与280的比值,如果对于RNA纯制品,其 OD260/OD280大约在2.0左右,OD260/OD230应大于2。
2楼2010-07-25 17:40:35
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