24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1822  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于电转酵母X33的问题已有7人参与

我的表达载体是用的PPICZa,现在电转酵母X33感受态细胞,电压2000v,通电时间3~5ms,但是电转了很多次都得不到阳性转化子。电转的结果要么是不长菌,要么是正常时间里(隔一天长菌)长菌,但是菌落PCR检测全为阴性,不知道还有什么因素会影响电转效率??(基本可以确定我的感受态效果较好,线性化的产物浓度也很大,每80ul感受态加入10ul线性化产物)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-06 19:46:23:
你用什么buffer重悬酵母的?是不是电阻太小,导致电流过大?

就是1M/L的三梨醇呀,新配的。感受态也是新做的,基本上用到的所有东西都是现配现用的了,就是转不出来,实验室另一个人跟我做的差不多,只是外援基因不一样,他就是一次性电转成功。
7楼2010-07-07 07:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


王雨云(金币+1):谢谢参与
王雨云(金币+1): 2010-07-07 07:43:31
貌似你以前咨询过这个问题吧
2楼2010-07-06 18:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)


王雨云(金币+1):谢谢参与
王雨云(金币+1): 2010-07-07 07:43:37
你用什么buffer重悬酵母的?是不是电阻太小,导致电流过大?
3楼2010-07-06 19:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

旋木晴晴

金虫 (小有名气)

妞妞



王雨云(金币+1):谢谢参与
楼主怎么确定你的感受态没问题?建议电转后加山梨醇30°保温时间适当延长。
4楼2010-07-06 20:40:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见