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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于PCR
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～

[交流] 【求助/交流】关于PCR 已有7人参与

PCR想P一段片段，上下游引物都是primer5设计的，应该没问题，但是非特异的条带超多，特异的没有，大家讨论一下会是那里出的问题啊？多谢！
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平和悦衲！
1楼 2010-07-01 10:09:27
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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看天(金币+2):热心回答 2010-07-01 16:09:42
从lz的情况来看，应该是引物的特异性不好。不知用的是什么作为模板？

没有特异的目的片段，估计lz得更换其他引物了。

建议lz可以先提高一下退火温度试试。

祝好运！
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-07-01 15:56:33
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wz-louis

银虫 (小有名气)
★ ★
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lmzxcom1(金币+1):分析的很详尽 2010-07-01 23:13:01
如果说非特异性产物特别多的话，可能是存在以下几个问题：
1.引物的特异性不好。
2.DNA可能断裂
3.退火温度过低，可适当调高一些。
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笑面人生
3楼2010-07-01 22:39:21
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
唉  设计了梯度PCR 还是不行啊  估计是引物的问题吧
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平和悦衲！
4楼2010-07-02 08:34:02
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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)
建议lz可以先提高一下退火温度试试
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5楼2010-07-02 08:39:23
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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一般俺就是眼睛看引物，手写出来，扩出来没有问题~
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6楼2010-07-02 09:16:02
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
高手啊！但是得谦虚哦！  
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平和悦衲！
7楼2010-07-02 09:21:58
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-02 12:00:22
产生非特异性条带的原因不好说
1.可能你的引物不合适或模板不纯
2.可能退火温度不适宜
3.可能循环数太高或酶量过了
4.此外是否作了对照，你所用试剂是否被污染
不过按你的情况引物特异性不高可能性要高些
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8楼2010-07-02 09:33:34
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walker2898

银虫 (小有名气)
★
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引物的问题吧，用那个软件设计的也不一定好用啊！就是一百分，也可能p不出来啊！
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9楼2010-07-02 10:21:05
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