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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

[交流] 【求助/交流】关于PCR 已有7人参与

PCR想P一段片段,上下游引物都是primer5设计的,应该没问题,但是非特异的条带超多,特异的没有,大家讨论一下会是那里出的问题啊?多谢!
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平和悦衲!
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般俺就是眼睛看引物,手写出来,扩出来没有问题~
6楼2010-07-02 09:16:02
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2):热心回答 2010-07-01 16:09:42
从lz的情况来看,应该是引物的特异性不好。不知用的是什么作为模板?

没有特异的目的片段,估计lz得更换其他引物了。

建议lz可以先提高一下退火温度试试。

祝好运!
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-07-01 15:56:33
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wz-louis

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lmzxcom1(金币+1):分析的很详尽 2010-07-01 23:13:01
如果说非特异性产物特别多的话,可能是存在以下几个问题:
1.引物的特异性不好。
2.DNA可能断裂
3.退火温度过低,可适当调高一些。
笑面人生
3楼2010-07-01 22:39:21
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

唉  设计了梯度PCR 还是不行啊  估计是引物的问题吧
平和悦衲!
4楼2010-07-02 08:34:02
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