| 查看: 690 | 回复: 2 | |||
[交流]
【求助/交流】关于PCR产物和限制性内切酶产物跑出的电泳条带的问题
|
我在做一个snp基因分型的，用PCR—FRLP法，内切酶用的是MSPI，位点是VKORC1-1639G>A,若基因型是AA型，则片段为290bp;若为AG型，则切出来的片段为290、122、168bp；若为GG型，则切出来的片段为168、122bp。上图先。 从右边数第2、3是PCR产物，6、7、8、9是这个位点的酶切产物。跑出来的电泳图有几个问题，1是位点的PCR非特异扩增很严重，但是我的退火温度已经为63°C了，不知道还能改进哪些？2是最亮的条带明显超过了290bp，在300bp左右了都，但是PCR产物和酶切产物位置还差不多，是不是因为边缘效应呢？不明白为什么？ 3是两边的maker跑的都不对称。哎，期待回答啊！！感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有240人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
求一个访问学者邀请函，非常非常感谢
+1/677
-
博士去军队文职怎么样
+5/210
-
16年了，来看看大家
+1/198
-
上海师范大学生物医用材料方向招收2026级博士研究生
+1/81
-
中国石油大学（华东）电气工程专业博士研究生招生
+1/79
-
内蒙古大学能源材料化学研究院招聘2026年博士生
+1/73
-
北京-89175-事业单位-诚征女友
+1/66
-
中科院理化技术研究所张飞龙研究员/王树涛研究员团队招生（博士/硕士）
+1/29
-
中国地质大学（北京）王琳课题组招收2026年硕转博/申请-考核博士研究生-1月8日截止
+1/28
-
北京林业大学木质素高值化利用创新团队招收2026年入学博士生
+1/25
-
2026博士招生-上海大学先进耐火材料全国重点实验室-招收冶金工程博士研究生-1-2名
+1/20
-
华中科技大学袁书珊教授团队招2026年申请审核制博士生1-2名
+1/15
-
SCI，计算机相关可以写
+1/15
-
福建师范大学柔性电子学院招收2026年博士（储能材料与柔性电子器件）
+2/14
-
SCI计算机相关论文
+1/9
-
中国科学院大学-杨晗课题组-诚聘-博士后、副研究员
+1/6
-
中科院（广州）研究团队招聘无机非金属材料方向特别研究助理或博后
+1/4
-
液晶拓扑光子学博士招生（电子科技大学）
+1/3
-
上海交通大学环境学院（环境化学与环境毒理学；大数据与人工智能）博士后招聘～
+1/3
-
[招募] 上海交通大学环境健康课题组科研实习生（环境健康与生物学大数据方向）
+1/2
★ ★
qixinkumu(金币+1): 2010-12-09 01:13:49
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 08:27:01
qixinkumu(金币+4): 2011-04-25 20:18:23
qixinkumu(金币+1): 2010-12-09 01:13:49
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 08:27:01
qixinkumu(金币+4): 2011-04-25 20:18:23
|
电泳要跑的平的话电压一定要在5V/cm以下，电泳二十五分钟以上，两根电极铂丝之间的距离一般是15cm。所以是75V，半小时 至于PCR的非特异建议使用常规优化常用的冷启动和降落PCR，镁离子浓度也可以减低一点点试试，多态性分析..你这个引物应该是文献上的吧..如果是就参考一下别人，如果是自己设计的可以重新找一段设计，解决这个问题 嘿嘿 |
2楼2010-12-09 00:57:47
3楼2010-12-14 22:15:19