| 查看: 720 | 回复: 2 | |||
[交流]
【求助/交流】关于PCR产物和限制性内切酶产物跑出的电泳条带的问题
|
我在做一个snp基因分型的，用PCR—FRLP法，内切酶用的是MSPI，位点是VKORC1-1639G>A,若基因型是AA型，则片段为290bp;若为AG型，则切出来的片段为290、122、168bp；若为GG型，则切出来的片段为168、122bp。上图先。 从右边数第2、3是PCR产物，6、7、8、9是这个位点的酶切产物。跑出来的电泳图有几个问题，1是位点的PCR非特异扩增很严重，但是我的退火温度已经为63°C了，不知道还能改进哪些？2是最亮的条带明显超过了290bp，在300bp左右了都，但是PCR产物和酶切产物位置还差不多，是不是因为边缘效应呢？不明白为什么？ 3是两边的maker跑的都不对称。哎，期待回答啊！！感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有182人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
深圳技术大学集成电路与光电芯片学院郝俊杰课题组诚聘博士后、研究助理、访问学生
+2/136
-
化学化工学院 招收化工、化学、材料等相关方向研究生（学硕、专硕都有调剂名额）
+1/83
-
福建师范大学招收2026年化学、材料硕士3-4名
+1/82
-
【代人发帖勿站内信】【成都征男友】89年未婚博士漂亮女孩
+1/72
-
西北工业大学光子学研究团队诚聘博士后！
+2/46
-
找工作经验求助
+1/36
-
中科院生态环境研究中心国重实验室招聘客座研究生1-2名
+1/31
-
纺织科学与工程、材料化工方向招收研究生
+1/28
-
（国家级人才团队 ）医药与生物技术方向 “申请-考核”制博士研究生招生
+1/8
-
食品科学与工程083200-297分
+1/8
-
英国埃克塞特大学 & 法国巴黎萨克雷大学联合培养博士
+1/8
-
南京林业大学有机功能分子实验室博士生招生启事
+1/8
-
26年博士招生
+1/6
-
【第三轮招生，31号截止】澳科大诚招2026秋全奖博士研究生（纳米医学/生物材料方向）
+1/6
-
福建师范大学 院士团队 招2026级博士1名
+1/5
-
重庆大学诚招2026年生物材料方向博士生
+1/4
-
复旦大学集成电路学院程增光课题组急聘科研助理
+1/3
-
课题组招收环境及相关专业调剂硕士研究生（欢迎优秀学生加入）
+1/3
-
欢迎报考浙江工业大学埃克塞特联合学院硕士研究生
+1/1
-
339求调剂
+1/1
★ ★
qixinkumu(金币+1): 2010-12-09 01:13:49
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 08:27:01
qixinkumu(金币+4): 2011-04-25 20:18:23
qixinkumu(金币+1): 2010-12-09 01:13:49
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 08:27:01
qixinkumu(金币+4): 2011-04-25 20:18:23
|
电泳要跑的平的话电压一定要在5V/cm以下，电泳二十五分钟以上，两根电极铂丝之间的距离一般是15cm。所以是75V，半小时 至于PCR的非特异建议使用常规优化常用的冷启动和降落PCR，镁离子浓度也可以减低一点点试试，多态性分析..你这个引物应该是文献上的吧..如果是就参考一下别人，如果是自己设计的可以重新找一段设计，解决这个问题 嘿嘿 |
2楼2010-12-09 00:57:47
3楼2010-12-14 22:15:19
