| 查看: 688 | 回复: 2 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】关于PCR产物和限制性内切酶产物跑出的电泳条带的问题
|
|||
我在做一个snp基因分型的，用PCR—FRLP法，内切酶用的是MSPI，位点是VKORC1-1639G>A,若基因型是AA型，则片段为290bp;若为AG型，则切出来的片段为290、122、168bp；若为GG型，则切出来的片段为168、122bp。上图先。 从右边数第2、3是PCR产物，6、7、8、9是这个位点的酶切产物。跑出来的电泳图有几个问题，1是位点的PCR非特异扩增很严重，但是我的退火温度已经为63°C了，不知道还能改进哪些？2是最亮的条带明显超过了290bp，在300bp左右了都，但是PCR产物和酶切产物位置还差不多，是不是因为边缘效应呢？不明白为什么？ 3是两边的maker跑的都不对称。哎，期待回答啊！！感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有224人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
博士去军队文职怎么样
+5/210
-
16年了，来看看大家
+1/198
-
DNA甲基化位点定量试剂盒（qPCR版）-适合特定基因位点5mC定量检测
+1/84
-
中国石油大学（华东）电气工程专业博士研究生招生
+1/79
-
南京理工大学曾海波/李伟金 招聘博士后（电磁响应：介电调控等方向）
+1/78
-
北京-89175-事业单位-诚征女友
+1/76
-
澳门大学智慧城市物联网国重“结构智能感知、健康监测与无损检测”研究方向博士后招聘
+1/74
-
内蒙古大学能源材料化学研究院招聘2026年博士生
+1/73
-
北京—征老婆
+1/64
-
上海科技大学物质科学与技术学院｜王平鸾课题组联合招聘博士后
+1/42
-
中科院理化技术研究所张飞龙研究员/王树涛研究员团队招生（博士/硕士）
+1/32
-
限广州，征女友
+2/32
-
SCI，计算机相关可以写
+1/20
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/17
-
上海交通大学环境学院（环境化学与环境毒理学；大数据与人工智能）博士后招聘～
+1/5
-
单晶结构解析练习合集72 (720+数据案例)
+5/5
-
液晶拓扑光子学博士招生（电子科技大学）
+1/4
-
上海理工顾敏院士/李蔚团队招收2026级博士研究生 （集成光学、量子信息方向）
+1/3
-
双一流天津工业大学电信学院李鸿强教授招收2026年申请审核制博士3人
+1/3
-
电子科技大学激光与光子制造团队招硕士博士
+1/1
3楼2010-12-14 22:15:19
★ ★
qixinkumu(金币+1): 2010-12-09 01:13:49
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 08:27:01
qixinkumu(金币+4): 2011-04-25 20:18:23
qixinkumu(金币+1): 2010-12-09 01:13:49
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 08:27:01
qixinkumu(金币+4): 2011-04-25 20:18:23
|
电泳要跑的平的话电压一定要在5V/cm以下，电泳二十五分钟以上，两根电极铂丝之间的距离一般是15cm。所以是75V，半小时 至于PCR的非特异建议使用常规优化常用的冷启动和降落PCR，镁离子浓度也可以减低一点点试试，多态性分析..你这个引物应该是文献上的吧..如果是就参考一下别人，如果是自己设计的可以重新找一段设计，解决这个问题 嘿嘿 |
2楼2010-12-09 00:57:47