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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～

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[交流] 【求助/交流】关于PCR 已有7人参与

PCR想P一段片段，上下游引物都是primer5设计的，应该没问题，但是非特异的条带超多，特异的没有，大家讨论一下会是那里出的问题啊？多谢！

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平和悦衲！

1楼 2010-07-01 10:09:27

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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)

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建议lz可以先提高一下退火温度试试

5楼2010-07-02 08:39:23

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查看全部 9 个回答

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):热心回答 2010-07-01 16:09:42

从lz的情况来看，应该是引物的特异性不好。不知用的是什么作为模板？

没有特异的目的片段，估计lz得更换其他引物了。

建议lz可以先提高一下退火温度试试。

祝好运！

赞一下(2人)

我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。

2楼2010-07-01 15:56:33

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wz-louis

银虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lmzxcom1(金币+1):分析的很详尽 2010-07-01 23:13:01

如果说非特异性产物特别多的话，可能是存在以下几个问题：
1.引物的特异性不好。
2.DNA可能断裂
3.退火温度过低，可适当调高一些。

赞一下(2人)

笑面人生

3楼2010-07-01 22:39:21

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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～

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唉设计了梯度PCR 还是不行啊估计是引物的问题吧

平和悦衲！

4楼2010-07-02 08:34:02

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