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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】原核表达蛋白没有表达求助！已有12人参与

构建了3个融合基因片段，倒入PQE30载体，测序正确后，诱导表达只有1个蛋白表达了，条件都是一样的
转化，摇菌12H，菌液PCR验证正确，转接， 37℃2.5H ，1:50转接 37℃，1MMOL/L IPTG 1：1000 诱导3H，超声裂菌，SDS-PAGE结果其中的一个表达了，2个没有表达，求助，谢谢！
有位虫友告诉我让我重新连接，转化，可是我测序是正确的啊！不知道是什么原因?

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ]

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1楼 2010-06-28 09:19:33

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金百合666666

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

Originally posted by jiangkuo0520 at 2010-06-28 09:19:33:
构建了3个融合基因片段，倒入PQE30载体，测序正确后，诱导表达只有1个蛋白表达了，条件都是一样的
转化，摇菌12H，菌液PCR验证正确，转接， 37℃2.5H ，1:50转接 37℃，1MMOL/L IPTG 1：1000 诱导3H，超声裂菌， ...

可以多换几个载体试试，有时候就是需要靠运气的

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