| 查看: 835 | 回复: 2 | |||
[交流]
【求助/交流】请教酶活测定的问题 已有2人参与
|
| 各位前辈，请问有哪一位做过淀粉合成关键酶酶活的测定啊，那个标准曲线的底物是怎么做的呢 |
回复此楼» 猜你喜欢
新审查指南施行半年，AI方向的专利申请是不是更看"技术味"了？
已经有22人回复
-
专利优先审查新办法出了，哪些成果值得走快速预审通道？
已经有33人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有136人回复
-
新审查指南堵死了"一案双申"的老路，实用新型和发明只能二选一了？
已经有27人回复
-
课题快结题了才发现没东西可申请专利？四个维度帮你挖一挖
已经有22人回复
-
论文投出去之前到底要不要先申请专利？被审稿周期坑过一次后的复盘
已经有8人回复
-
横向课题结题时企业突然问专利归谁，合同里没约定的话默认算谁的？
已经有22人回复
-
教师节聊点实在的：很多老师的专利正在悄悄失效
已经有21人回复
-
INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE 征稿（双刊号，版面费 200
已经有0人回复
-
第一次独立答复专利审查意见，才发现这活跟毕业答辩是一个套路
已经有24人回复
-
使用QE质谱仪检测杂质含量
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 分光光度计测定酶活中的问题
已经有9人回复
- 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题
已经有13人回复
- 测酶活的相关问题
已经有5人回复
- 福林酚法测定蛋白酶活力出现问题了
已经有11人回复
- 果胶酶活力测定
已经有10人回复
- 碘量法测定淀粉酶活性的问题
已经有14人回复
- 请教脂肪酶活性测定
已经有14人回复
- 【急】求助关于蔬菜护色中酶活测定的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】请教高手一个问题，关于酶活力定义
已经有9人回复
- 【求助】土壤脲酶活性测定中的问题
已经有47人回复
- 以NADH为底物的酶的酶活测定
已经有10人回复
biolio2009
木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2329.2
- 散金: 32
- 红花: 5
- 帖子: 1039
- 在线: 124.9小时
- 虫号: 1033127
- 注册: 2010-06-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2010-06-26 16:04:08
|
[4.3.5.1 AGPase的酶活测定 取20μL粗酶液加入110μL反应液中(反应液含终浓度100mmol•L-1Hepes-NaOH(pH=7.5)，1.2 mmol•L-1ADPG，3mmol•L-1PPi，5mmol•L-1MgCl2，4 mmol•L-1 DTT)，30℃反应20min，沸水中终止反应30s，10000×g，10min；取上清液100μL加5.2μL比色液(5.76mmol•L-1NADP，0.08unit P-guco-mutase，0.07unit G6P-dehydrogenase)，30℃反应10min，测定340nm OD值（Nakamura，1989)。 4.3.5.2 SSS和GBSS的酶活测定 取20μL粗酶液加入36μL反应液(反应液含终浓度为50mmol•L-1Hepes-NaOH(p H=7.5)，1.6mmol•L-1ADPG，0.7mg amylopectin，15mmol•L-1DTT)。30℃反应20min，沸水中终止反应30s，冰浴冷却；加20μL反应液(含50 mmol•L-1Hepes-NaOH(pH =7.5)， 4mmol•L-1PEP，200 mmol•L-1KCL，10mmol•L-1 MgCl2，1.2unit Pyruvate Kinase)，30℃反应20min，沸水中终止反应，10000×g离心10 min。取上清液60μL与43μL反应液(50mmol•L-1Hepes-NaOH(pH=7.5)，10mmol•L-1Glucose，20mmol•L-1 MgCl2，2 mmol•L-1NADP，1.4 unit Hexoki-nase，0.35unit G6P-dehydrogenase)，30℃反应10min，测定340nm OD值的变化。 GBSS活性的测定，取20μL 沉淀悬浮液，其余步骤同SSS酶活性的测定。 4.3.5.3 SBE的酶活测定 取酶液150μL，加150μL0.2 mol•L-1柠檬酸缓冲液(pH7.0)、75μL0.1 mol•L-1EDTA、40μL7.5g.L-1可溶性淀粉，在37℃水浴中加热40 min，再加24μL碘液显色10min，在660nm处测OD值，以零时为对照，Q 酶活性以OD 660nm下降的百分率表示: △OD660=(OD660零-OD660 t)/OD660零时×100%（李太贵等，1997)。 |
3楼2010-06-28 22:14:18
10