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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【专题】real time pcr目的基因的融解曲线不明白
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liying6929

金虫 (正式写手)

[交流] 【专题】real time pcr目的基因的融解曲线不明白 已有8人参与

大家好
      最近做实时定量，我的目的基因的融解曲线显示三个峰，在珠峰前面有一个小峰，后面有一个比主峰稍低的峰，但是将该反应后的样品跑电泳，只有特异的一条带这是为什么呢？
     我用的仪器是ABI7500，试剂是 Takara的染料法
     还有怎样手动调节ct值和阈值呢？

[ Last edited by liying6929 on 2010-6-23 at 23:38 ]
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1楼 2010-06-22 22:52:14
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pidou213

木虫 (正式写手)
是不是因为你的是家族基因呢？
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见得多爱的多
2楼2010-06-22 23:15:46
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wywangying169

银虫 (小有名气)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:08:53

主峰前面的峰有可能是引物扩增引起的，后面的峰就不太清楚了，我用的7300，不知道9700怎么用！
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好好自学，好好工作
3楼2010-06-23 16:06:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-25 03:43:03
琼脂糖跑不出来极有可能是电泳分辨率的问题，一个是很难把长度这么接近的片段分开，一个是含量太低没能检出
但是qPCR是很灵敏的

PS：是7900……
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4楼2010-06-23 16:16:48
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wangcheng2650

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):有可能。 2010-06-25 08:44:02
可能是引物扩增造成的
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日子是混出来的！
5楼2010-06-25 00:55:05
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):有可能。 2010-06-25 08:44:15
不排除 电泳的灵敏度造成
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6楼2010-06-25 08:20:44
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Rick001

铁杆木虫 (职业作家)

钓鱼岛环保首席秘书
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
学习了，分析的都有道理
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☆☆☆想开了，便能走出去☆☆☆
7楼2010-08-09 22:59:15
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
琼脂糖电泳很可能是分不开大小相差很小的条带的。
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8楼2010-08-10 11:43:56
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yipingming

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
前面的峰有可能是引物二聚体造成的，后面的不是很清楚，我做时有时也会有，希望高手指点，大家一起学习！
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9楼2012-04-05 22:31:06
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