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liying6929

金虫 (正式写手)

[交流] 【专题】real time pcr目的基因的融解曲线不明白 已有8人参与

大家好
      最近做实时定量,我的目的基因的融解曲线显示三个峰,在珠峰前面有一个小峰,后面有一个比主峰稍低的峰,但是将该反应后的样品跑电泳,只有特异的一条带这是为什么呢?
     我用的仪器是ABI7500,试剂是 Takara的染料法
     还有怎样手动调节ct值和阈值呢?

[ Last edited by liying6929 on 2010-6-23 at 23:38 ]
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yipingming

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
前面的峰有可能是引物二聚体造成的,后面的不是很清楚,我做时有时也会有,希望高手指点,大家一起学习!
9楼2012-04-05 22:31:06
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pidou213

木虫 (正式写手)

是不是因为你的是家族基因呢?
见得多爱的多
2楼2010-06-22 23:15:46
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wywangying169

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:08:53

主峰前面的峰有可能是引物扩增引起的,后面的峰就不太清楚了,我用的7300,不知道9700怎么用!
好好自学,好好工作
3楼2010-06-23 16:06:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-25 03:43:03
琼脂糖跑不出来极有可能是电泳分辨率的问题,一个是很难把长度这么接近的片段分开,一个是含量太低没能检出
但是qPCR是很灵敏的

PS:是7900……
4楼2010-06-23 16:16:48
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