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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】反转录有问题
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dapaosheng

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】反转录有问题 已有2人参与

最近一直在做反转录的实验，但却没有扩增出我要的目的片段，不知道究竟是RNA质量不好还是引物设计有问题。我把我提取的RNA（用家蚕头部提取的）发给各位看看，大家觉得能用来做反转录吗？我想针对鳞翅目昆虫的乙酰胆碱酯酶基因设计一对简并引物，应该怎样做呢？已经根据国内发表的文章提供的序列设计特异的引物扩增过了，但扩增不出目的片段，所以有点怀疑他们提交的序列是假的，因此想自己设计一对简并引物来扩增家蚕的乙酰胆碱酯酶基因。请各位高手指点一下！
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1楼 2010-05-29 23:24:37
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-30 21:20:08
RNA提的挺好的。。。不一定是他们的问题。。。不同家蚕之间同一基因会有一定的差异的。。可能你设计的３‘端正好不同。。要不你在设计几条引物看看；
要是扩增保守去的话，你比对几个近源物种的乙酰胆碱酯酶蛋白序列，找到保守区，根据保守区设计兼并引物。。。拿到保守区后再做RACE。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-30 18:00:09
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sunqx

木虫 (著名写手)
基因的保守性如何？本来就可能不怎么好扩。多试试条件 和引物吧
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3楼2010-05-30 18:43:42
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