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[交流]
【求助/交流】RNA中DNA污染物的去除 Fermentas的DNase I
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fermentas 的DNASE1 RNA最好用DNase处理一下，于是订购了Fermentas的DNase I，（因为逆转录盒子也是Fermentas）可一看说明有点傻眼，本来是想找点捷径，简化DNase消化，可是体系是这样建议的： Add to an RNase-free tube: RNA 1μg 10X reaction buffer with MgCl2 1μl DEPC-treated Water (#R0601) to 9μl Deoxyribonuclease I (DNase I), RNase-free (1u/μl) 1μl (1u) Note If larger amounts of DNA-free RNA are required, the reaction mixture should be scaled up. Ribonuclease inhibitor (typically 1u/μl) can also be included in the reaction mixture to prevent RNA degradation. Incubate at 37°C for 30 minutes. Add 1μl 25mM EDTA and incubate at 65°C for 10 minutes. RNA hydrolyzes during heating in the absence of a chelating agent (4). Use the prepared RNA as a template for reverse transcriptase. 这样的话即便是RNA模板取1ug，那消化的这个体系也要配到11ul了，可是后面的逆转录盒子却也不允许呀，如下： Template RNA total RNA 0.1-5 μg oligo (dT)18 primer 1 μl DEPC-treated water to 12 μl Total volume 12 μl 这样的话，如果要是RNA模板采用1ug的话，那就不知怎么加入到逆转录体系了，量太大了，再者消化的体系会不会对逆转录有影响呢，因为Fermentas的盒子并没有说明这个问题 试剂盒里说可以直线扩大体系 然后用苯酚氯仿处理后再用乙醇洗 所以我就想知道除了以上方法 有没有什么更简便的方法可以处理 如果实在没有 ，用苯酚氯仿处理后再用乙醇具体操作和条件是怎么样的，能否告之 因为很急着要用 麻烦大家了 谢谢哈 |
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