| 查看: 731 | 回复: 0 | |||
[交流]
【求助/交流】RNA中DNA污染物的去除 Fermentas的DNase I
|
|
fermentas 的DNASE1 RNA最好用DNase处理一下，于是订购了Fermentas的DNase I，（因为逆转录盒子也是Fermentas）可一看说明有点傻眼，本来是想找点捷径，简化DNase消化，可是体系是这样建议的： Add to an RNase-free tube: RNA 1μg 10X reaction buffer with MgCl2 1μl DEPC-treated Water (#R0601) to 9μl Deoxyribonuclease I (DNase I), RNase-free (1u/μl) 1μl (1u) Note If larger amounts of DNA-free RNA are required, the reaction mixture should be scaled up. Ribonuclease inhibitor (typically 1u/μl) can also be included in the reaction mixture to prevent RNA degradation. Incubate at 37°C for 30 minutes. Add 1μl 25mM EDTA and incubate at 65°C for 10 minutes. RNA hydrolyzes during heating in the absence of a chelating agent (4). Use the prepared RNA as a template for reverse transcriptase. 这样的话即便是RNA模板取1ug，那消化的这个体系也要配到11ul了，可是后面的逆转录盒子却也不允许呀，如下： Template RNA total RNA 0.1-5 μg oligo (dT)18 primer 1 μl DEPC-treated water to 12 μl Total volume 12 μl 这样的话，如果要是RNA模板采用1ug的话，那就不知怎么加入到逆转录体系了，量太大了，再者消化的体系会不会对逆转录有影响呢，因为Fermentas的盒子并没有说明这个问题 试剂盒里说可以直线扩大体系 然后用苯酚氯仿处理后再用乙醇洗 所以我就想知道除了以上方法 有没有什么更简便的方法可以处理 如果实在没有 ，用苯酚氯仿处理后再用乙醇具体操作和条件是怎么样的，能否告之 因为很急着要用 麻烦大家了 谢谢哈 |
回复此楼» 猜你喜欢
263求调剂
已经有4人回复
-
石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告
已经有3人回复
-
一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂
已经有13人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有6人回复
-
328求调剂，英语六级551，有科研经历
已经有10人回复
-
298求调剂
已经有6人回复
-
310求调剂
已经有4人回复
-
311求调剂
已经有6人回复
-
307求调剂
已经有11人回复
-
材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- rt-pcr电泳图，求好心虫友帮助分析一下，跪谢。。。
已经有14人回复
- 用PCR扩增后的DNA如何测序？不能直接用PCR就知道是什么菌种之类的吧？
已经有6人回复
- DNA琼脂糖凝胶电泳所需DNA的最低浓度
已经有6人回复
- 提取出的DNA是无色透明的还是黄白色的？
已经有15人回复
- 请问，两条不同来源的DNA序列，相似度达到多少时，才可以判定为同源？
已经有8人回复
- 谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀？离心之后能用肉眼看到DNA吗？
已经有24人回复
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 关于细菌RT-PCR的一些问题，希望同行探讨一下
已经有4人回复
- 【求助/交流】有图，求真相！
已经有7人回复
- 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！
已经有14人回复
- 【求助/交流】如何去除DNA中的RNA
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理
已经有11人回复
- 【求助/交流】DNase 处理 RNA 的具体步骤（不用试剂盒）
已经有12人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
