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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么酶切总是切不开？
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沐风望野

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么酶切总是切不开？ 已有11人参与

我通过同源重组得到一个大约为27Kb的质粒，已经通过其他六种酶酶切验证过其正确性了，但是接下来用MunI和XbaI双酶切质粒时根本切不开，换用这两种酶分别单酶切也切不动质粒，请问可能是什么问题呢？
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1楼 2010-05-27 12:57:23
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-27 14:46:48
很明显，质粒序列突变了，或者甲基化了。，我经常遇见，正好是要用的酶切位点有变化，唉～
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4楼2010-05-27 14:35:32
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-27 14:46:28
楼主的质粒好大啊~
可以试试加大酶量，要不可以在网上查查相关的大片段质粒如何有效酶切的？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-05-27 14:09:50
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catherine_

木虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-27 14:46:39
我k...
你用这么大的质粒有啥用啊！！！
xbaI 单酶都切不动。。。你确信这个质粒的序列没问题？
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3楼2010-05-27 14:16:56
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
可以测序 看看你这两个酶切位点附近是否发生了碱基突变！
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5楼2010-05-27 16:09:50
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