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沐风望野

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么酶切总是切不开?已有11人参与

我通过同源重组得到一个大约为27Kb的质粒,已经通过其他六种酶酶切验证过其正确性了,但是接下来用MunI和XbaI双酶切质粒时根本切不开,换用这两种酶分别单酶切也切不动质粒,请问可能是什么问题呢?
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catherine_

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-27 14:46:39
我k...
你用这么大的质粒有啥用啊!!!
xbaI 单酶都切不动。。。你确信这个质粒的序列没问题?
3楼2010-05-27 14:16:56
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-27 14:46:28
楼主的质粒好大啊~
可以试试加大酶量,要不可以在网上查查相关的大片段质粒如何有效酶切的?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-05-27 14:09:50
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-27 14:46:48
很明显,质粒序列突变了,或者甲基化了。,我经常遇见,正好是要用的酶切位点有变化,唉~
4楼2010-05-27 14:35:32
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jingcp200320

银虫 (小有名气)

可以测序 看看你这两个酶切位点附近是否发生了碱基突变!
5楼2010-05-27 16:09:50
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