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【求助/交流】跪求反转录失败的原因 已有8人参与
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 这是我最近提取的RNA电泳图，图本身看上去不太好，所以就测了od值A260/A280为2.0。 接着做反转录，按照takara AMV 3.0反转录试剂盒进行操作。内参的条带很好，但目的基因的条带始终呈弥散状，反转录条件如下设置： (42度 30分钟，99度 5分钟，5度5分钟) 1循环； pcr设置： 94度 5分钟；(94度 30秒，52度 30秒，72度 1分钟) 50个循环；72度 7分钟。 设置50个循环是个人觉得cDNA的量较少，根据说明书来调整的。  这是反转录的条带，左边两条带呈弥散状，右边是指示条带，想看看rna抹带在什么位置，如果反转录成功，那么得到的条带应与右边条带位置相同。这两个rna条带是分别用两组引物来反转录的，也试过调整引物、退火温度等，但是已经做了近半年了，依然是这样的条带。求各位帮忙，谢谢! |
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刘仕博
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4楼2010-05-07 12:27:54